脐血树突状细胞诱导抗子宫内膜癌细胞毒性反应的体外研究

【摘要】：目的:研究脐血来源树突状细胞(DC)的培养方法, 观察子宫内膜癌冻融抗原致敏DC体外诱导生成细胞毒性T 淋巴细胞(CTL)对子宫内膜癌细胞的特异性杀伤效应,探讨 DC应用于子宫内膜癌免疫治疗的可行性。方法:取对数生长期的子宫内膜癌Ishikawa细胞经反复冻融制备成冻融抗原。体外采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法从正常脐血分离单个核细胞(MNCs),并在粒-单核细胞集落刺激因子(rhGM- CSF)、白细胞介素4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子α(rhTNF-α) 作用下诱导分化为DC。DC经抗原致敏后形成DC瘤苗,用以激活T淋巴细胞及诱导生成抗原特异性CTL细胞。形态学上利用倒置显微镜观察DC的生长情况,扫描电镜观测其表面形态。采用流式细胞仪分析抗原致敏DC细胞表型的变化。混合淋巴细胞反应(MLR)比较抗原致敏DC与未致敏DC和冻融抗原体外刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。MTT法检测抗原致敏DC激活的特异性CTL对Ishikawa的杀伤作用,并以卵巢癌SK—OV-3细胞和肝癌SMMC-7721细胞作对照,同时设立未致敏DC、冻融抗原和单纯CTL对照组。ELISA法检测以上四组不同培养条件下上清中IL—12和IFN—γ的含量。结果:8例脐血标本均诱导生成具有典型特征的DC,细胞体积较大,表面粗糙,电镜下细胞表面可见大量指状突起,同时其高表达CD1a(45．31％±7．42％)、CD83(50．82％±8．31％)、CD80(63．04％±7．90％)、CD86(67．10％±7．95％) 和人类白细胞抗原-DR分子(HLA—DR,73．45％±8．95％), 具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力(SI=2．45±0．31)。经抗原致敏的DC其表面各分子的表达较未致敏DC均升高 (53．54％±6．82%,61．50％±8．98％,82．51％±7．16％,82．41％± 6．90％,86．76%±6．66％)(P0．05),其刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力(SI=4．49±0．50)明显高于未致敏DC组(SI=2．45± 0．31)和冻融抗原组(SI=1．07±0．12)(P0．05)。致敏DC诱导生成的CTL对子宫内膜癌细胞有较强的杀伤作用(84．34％± 9．21％),而对SK—OV-3细胞和SMMC-7721细胞无明显的杀伤活性(32．30％±5．30％)和(28．42％±4．59％)(P0．05), 并且在同效靶比(100:1)下其对子宫内膜癌细胞的杀伤作用 (84．34%±9．21％)明显高于未致敏DC组(31．27％±5．47％)、冻融抗原组(22．18％±5．18％)和对照组(10．22％±2．51％)(P 0．05)。致敏DC与淋巴细胞共培养产生的IL—12和IFN— r也明显高于未致敏DC组、冻融抗原组和对照组(P0．05)。结论:脐血单个核细胞可诱导分化出具有典型特征的D C, 并且抗原负载DC体外诱导生成的细胞毒性T淋巴细胞可引发特异性的抗肿瘤反应。