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《第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集》2006年
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骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞U2OS作用的研究

何焕玲  左国伟  赖天霞  王嫣  陈小菊  李星星  苗静琨  谭启华  寇小琴  周兰  
【摘要】:目的:骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)是目前所知的唯一可诱导异位骨形成的蛋白家族,其中BMP-2、-6、-7和-9具有较高的成骨活性,BMP-2和- 7已经在临床上试用于开放性胫骨骨干骨折和牙槽嵴缺损的修复;骨肉瘤是骨组织最常见的原发性肿瘤,恶性程度较高, 尽管目前以保肢为主的综合治疗可以使其生存率达,但如何促进临床治疗后遗留骨缺损的修复与重建是一难题。本实验研究了BMP-2和-6对人骨肉瘤细胞株U2OS的作用,借以探讨将BMPs用于促进骨肉瘤患者的骨缺损修复的可能性。方法:首先,采用免疫细胞化学法检测BMP-2和-6在人骨肉瘤细胞U2OS中的内源性表达情况;然后,用表达人BMP- 2和-6的重组腺病毒感染U2OS细胞株后,利用台盼蓝拒染法检测细胞增殖能力,TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/ EB)荧光双染法检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞迁移能力,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察细胞成骨分化能力的变化。结果:在未感染的骨肉瘤细胞株U2OS中, BMP-2和-6均呈阳性表达;AdBMP-2和-6作用于U2OS 细胞株后,随着时间的延长,细胞存活率降低(台盼蓝拒染法发现AdBMP-2组在24、48和72 h细胞存活率依次分别为AdGFP组的84.53%、72.96%和10.10%,AdBMP-6组分别是85.88%、55.35%和9.54%),穿膜的细胞数逐渐减少 (Transwell小室检测发现AdBMP-2组在24、48和72 h的穿膜细胞数分别为AdGFP组的42.56%、54.80%和76.78%, AdBMP-6组分别为42.89%、55.36%和70.03%),而细胞凋亡率则逐渐增加(TUNEL法实验结果发现,在24、48和72 h,AdBMP-2处理的U2OS细胞的凋亡率分别是AdGFP对照组的1.73倍、10.30倍和19.81倍,AdBMP-6组分别是 AdGFP组的1.84倍、9.61倍和19.35倍;AO/EB荧光双染法检测发现,在24、48和72 h,AdBMP-2处理的U2OS 细胞的凋亡率分别是AdGFP对照组2.01倍、15.51倍和 8.73倍,AdBMP-6组分别是AdGFP组的3.06倍、12.21 倍和30.24倍),ALP活性随时间延长增加(AdBMP-2处理U2OS细胞后,在第3、5、7、9 d ALP活性依次分别较AdGFP组增加了1.14倍、1.47倍、1.67倍和1.37倍, AdBMP-6组依次增加了0.50倍、1.00倍、1.08倍和1.63 倍)。以上结果与AdGFP对照组的差异均有显著性(p 0.01)。结论:人骨肉瘤细胞U2OS自身表达BMP-2和- 6;外源性BMP-2和-6均可以抑制该细胞株的增殖和迁移, 并诱导它们凋亡,促进向成骨细胞分化。

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