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《第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集》2006年
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抗原负载的树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究

李东印  孙桂森  段东明  张建智  闵军  褚忠华  谷川  
【摘要】:目的:肿瘤的生物治疗正成为肿瘤学研究的热点, 并被称为继手术、化疗、放疗之后的第四种治疗模式,随着对树突状细胞(dendritic cells,DCs)在免疫反应中所起的中心作用的认识的加深,以及体外大量培养DCs方法的建立, 以DCs为平台的肿瘤生物治疗受到广泛关注。树突状细胞是目前发现功能最强的专职抗原呈递细胞(APC),在体外制备负载肿瘤抗原的肿瘤特异性的DCs瘤苗,再注射回体内以激发机体产生主动性抗肿瘤免疫反应,是具有良好前景的生物治疗方案,目前已应用多种肿瘤的临床治疗。本研究的目的是制备肿瘤裂解物负载的DCs瘤苗并观察其体外诱导抗肿瘤免疫效应,探讨其制备方法。方法:抽取健康人(n=4)外周血, 以Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以细胞因子GM—CSF 和IL-4在体外将其诱导为树突状细胞,第6天采用不同方法分组处理:A组,仅用GM—CSF 和IL-4培养; B组,负载人肝癌细胞冻融抗原,C组,联合负载抗原及以TNF-α诱导成熟;D组,联合负载抗原及以鸡尾酒法(TNF-α+ IL-6+IL-1β+PGE2)诱导成熟。24小时后收获各组DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86和LHA- DR,以ELISA法检测其IL-12的分泌,MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖活性,将树突状细胞瘤苗与淋巴细胞以1:10的比例共培养获得免疫效应细胞,以乳酸脱氢酶释放试验检测免疫效应细胞对肝癌细胞的特异性细胞毒作用。结果:抗原负载或联合细胞因子均可诱导DCs的成熟和IL—12的分泌 (P0.05),成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力;抗原负载的B组、C组和D组DCs可诱导效应细胞对肝癌细胞 BeL-7402的特异性杀伤作用,以D组最为明显(P0.05)。结论:抗原负载的DCs可体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应, 提示临床上以抗原负载的树突状细胞作为肿瘤免疫治疗的方法是可行的。

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