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《第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集》2006年
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融合蛋白Fv-LDP免疫活性的研究

蔡琳  甄永苏  
【摘要】:目的:融合蛋白Fv—LDP是我室通过基因工程方法制备, 其抗体部分为抗IV型胶原酶抗体3G11的单链抗体 scFv,相当于“弹头”的载体部分为力达霉素辅基蛋白LDP。本实验研究了融合蛋白Fv—LDP的免疫学活性。方法:(1) 分别以IV型胶原酶、人纤维肉瘤细胞HT—1080、人结肠癌细胞HT-29、人高转移巨细胞肺癌细胞PG等为抗原,融合蛋白Fv—LDP为一抗,以Anti—His Tag单抗为二抗,间接 ELISA方法检测融合蛋白Fv—LDP的免疫学活性;(2)以人纤维肉瘤细胞HT-1080为例,观察融合蛋白Fv—LDP对肿瘤细胞分泌明胶酶的影响;(3)免疫细胞荧光法检测融合蛋白Fv-LDP与肿瘤细胞的免疫反应性(4)采用免疫组化(PV 二步法)检测融合蛋白Fv-LDP与人乳腺癌组织的免疫反应性;(5)重组基底膜侵袭实验分析融合蛋白Fv—LDP对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果:(1)间接ELISA结果表明,融合蛋白Fv—LDP与IV型胶原酶、HT—1080细胞、HT-29细胞、PG细胞等均具有免疫反应性。三种细胞中以HT—1080 细胞的相对亲和力最高,其次是PG细胞,HT-29细胞(2) 明胶酶谱实验显示,当融合蛋白Fv—LDP浓度达到2mg/mL 时,92KD负染条带消失;当浓度达到4mg/mL时,72KD 负染条带也消失,表明融合蛋白Fv—LDP可有效抑制肿瘤细胞分泌明胶酶,(3)免疫细胞荧光结果显示,肿瘤细胞HT- 1080胞浆着绿色荧光,表明融合蛋白Fv-LDP结合于肿瘤细胞的胞浆部位;(4)人乳腺癌组织免疫组化结果显示,融合蛋白Fv—LDP与乳腺癌癌细胞胞浆部位结合,呈明显棕黄色, 阴性对照片均无任何着色;(5)重组基底膜侵袭实验表明, 融合蛋白Fv-LDP可明显抑制肿瘤细胞对人工基底膜的侵袭, 并呈剂量依赖性。结论:融合蛋白Fv—LDP基本保留了完整单抗3G11对明胶酶的免疫活性,又因其携带有“弹头”的载体蛋白LDP,可以用烯二炔发色团进行强化,因此,有可能用于制备抗肿瘤抗体药物。

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