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《2000全国肿瘤学术大会论文集》2000年
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粘附法筛选胃癌细胞亚株及鉴定

陈向荣  
【摘要】:肿瘤细胞对基膜和细胞外基质(ECM)的粘附的相互作用是肿瘤细胞生物学行为表现的一重要步骤,尤其是在肿瘤的侵袭转移过程中(1)。层粘素(laminin)是 ECM 的主要成份,通过 integrin 等粘附分子的介导与细胞粘连,对肿瘤细胞有多重生物学作用,能促进细胞恶性表型的表现并且涉及到肿瘤侵袭转移的其他基本过程,并可能诱导某些蛋白酶的表达;肿瘤细胞与 laminin 的粘附在肿瘤细胞的恶性表型表达中是一重要因素。为了观察有关胃癌细胞侵袭转移的机理和影响因素,我们利用胃癌细胞在 laminin 上可能的不同粘附能力,筛选高粘附能力和低粘附能力的细胞亚株,初步鉴定其体内外的特性,可作为进一步研究的模型。材料与方法细胞培养和筛选: KN45胃低分化腺癌为本所保存,于5% CO2,37℃饱和湿度条件下, 常规培养于10% FCS-RPMI1640培养液(GIBCO),2~3天换液,一周传代。供筛选用 MKN45细胞生长于25cm~2培养瓶,达80%密度致对数生长期时,0.1% EDTA-PBS 消化,0.5% BSA-RPMI1640制细胞悬液,计数并经苔盼兰拒染测活力大于95%后,在培养皿(33mm 培养皿,50ug laminin 包板,Sigma 产品,4℃过夜,用前弃液后加1% BSA -1640,37℃,1小时封闭)中加2.5×105细胞,37℃,5% CO2培养 1小时,而后将未贴附的细胞转移至另一培养瓶中,加10% FCS- 1640使之生长扩增,已贴附于培养皿的细胞亦加10% FCS-1640扩增。贴附的细胞达一定数量后再重复上一过程,高贴附力的细胞被收集。未贴附的细胞扩增后亦再加入已包被 laminin 的培养皿,收集未贴附细胞。以上两过程被重复20次,最后建立 MKN45 Lm+和 Lin -细胞群。扩增后即于液氮冻存。以后的实验均取自最后一次筛选细胞的第5代以内之细胞后代。
【作者单位】:浙江省温州医学院附一院消化科
【分类号】:R735.2

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