FK228生物合成基因簇中LysR家族转录调控因子DepR结合区域的确定

【摘要】：目的:寻找FK228生物合成基因簇dep中Lys R家族转录调控蛋白Dep R的结合位点。方法:将N端带有His标签的重组蛋白Dep R在大肠杆菌中进行表达和纯化。PCR扩增dep基因簇中的基因间隔区域。通过凝胶阻滞实验确定重组蛋白Dep R是否与其结合。结果:在dep基因簇中并没有发现Dep R的结合区域,而基因簇下游与FK228生物合成无关的基因orf21(编码Min C同源蛋白,可能参与细胞分裂)的启动子区域可以被Dep R识别结合。结合位点逐步缩小到77 bp区域,该区域包含几个Lys R家族结合位点的特征序列5’-T-N11-A-3’,以及一个与大肠杆菌中Oxy R结合位点(5’-GATAGBYHWDRVCTATC-3’)相似的DNA序列5’-ATAG-N7-CTAT-3’。突变蛋白Dep R(C199T)失去了结合这个77 bp靶点的能力。结论:调控蛋白Dep R结合位点目前已经发现,为进一步研究其调节机制及其功能应用奠定基础。