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《中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编》2009年
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大珠母贝微卫星DNA标记的筛选分离与分析

柳明  喻达辉  黄桂菊  
【摘要】:采用生物素标记的(CA)_(15)探针和磁珠富集法构建了大珠母贝(Pinctada maxima)微卫星DNA文库,随机挑选了1200个菌落,经PCR筛选得到298个候选克隆,成功测序236个,分析获得397个微卫星序列,其中完美型、非完美型和混合型分别占74%、22%和4%。除探针中使用的CA重复外,还得到AT、GT、TC、AG、GC、TAA、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、CGTC、GACG、CTGT等重复序列。基于微卫星两端的侧翼序列设计引物90对,挑选其中30对合成并筛选出21对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群PCR扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测,获得了10个多态位点,共检测出62个等位基因,片段长度148~434bp。各位点等位基因数2~8个,平均等位基因数6.2个。多态性信息含量(PIC)为0.2225~0.8291,平均0.692。期望杂合度(H_e)为0.2593~0.8610,平均0.7232;观测杂合度(H_o)为.0.3~0.8,平均0.56。本研究通过对大珠母贝微卫星引物的分离和筛选,获得了一定数量的微卫星引物及其最佳扩增条件,为进一步进行大珠母贝分子遗传育种和种群遗传多样性研究奠定了一定基础。

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