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鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的表达——人转铁蛋白基因工程抗体的研制(5)

李兆隆  郭红玲  常彩琴  涂政  肖卫民  王明鑫  王俭  
【摘要】:拼接好并带有酶切基因座粘性末端的鼠抗人转铁蛋白的单链抗体基因经凝胶电泳定量后,同载体pCANTAB 5E连接,以其转化E.coli TG1细胞。经辅助噬菌体M1 3K07挽救构建噬菌体抗体表面呈现文库、抗原包被固相材料富集选择阳性重组噬菌体克隆(Panning)、铺板培养并挑选单个阳性菌落、液体扩大培养及再次挽救阳性克隆以得到足够的阳性噬菌体数,以之感染能产生可溶抗体片段的大肠杆菌菌株E.coli HB2151。在ELISA检测出抗原阳性株后,将被阳性噬菌体感染的E.coli HB2151菌株铺板,挑选单菌落及IPTG诱导扩大培养后,分离并分析E.coli HB2151的培养上清、外周质及全细胞提取物,以Anti-E末端抗体进行Western blot、培养上清对人转铁蛋白ELISA检验和分子量测定,证明人转铁蛋白的单链抗体成功的产生出来。

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