收藏本站
《中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会论文集》2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Rv0341用于诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病的研究概况

吴园  钟敏  王易伟  钟静  胡频频  毛旭虎  
【摘要】:1990年日本Nakamura等报道了1例依赖利福平的结核分枝杆菌(依R菌)感染病例。1999年我国耐药结核学术研讨会上首次提出结核分枝杆菌依赖利福平生长的现象。方法对依R菌的研究中发现,有R和无R两种生长条件下,其形态、结构、染色性、毒力和蛋白质等方面均有明显差异。依R菌在有R管中菌落粗大、凸起、花菜样、易刮取和乳化;在光镜下菌体粗大、深染;在透射电镜下菌体细胞壁完整。而在无R管中菌落细小、扁平、荷包蛋样、不易刮取和乳化;在光镜下菌体细小、浅染且大小不等;在透射电镜下菌体细胞壁缺陷。提示依R菌在无R条件下可呈细胞L型样改变。感染依R菌的肺结核病患者表现为病灶范围广、症状重、体征明显、病程长。比较依R菌在两种生长条件下的蛋白图谱,发现84%的依R菌在含R管中假设蛋白Rv0341的表达量明显增加;86%的非依R菌和标准株H_(37)Rv在含R管和无R对照管均没有Rv0341的高表达。结果利福平对Rv0341在依R菌中的表达有上调作用;Rv0341的高表达与依R菌结核病密切相关,可视为依R菌的相关蛋白或标志物。本研究用大肠杆菌做为阴性对照,利用聚合酶链式反应自依赖利福平(14株)、耐利福平(23株)、利福平敏感(12株)的结核分枝杆菌、H_(37)Rv及卡介苗(共51株)中扩增编码假设蛋白Rv0341的iniB基因,经ApaⅠ和EcoRⅤ、KpnⅠ和SmaⅠ两组双酶切,1%琼脂糖凝胶电泳检测其带型,进行限制性片段长度多态性分析。结果显示:iniB在不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的,测序结果也证实了不同类型结核分枝杆菌的iniB基因无突变。研究还采用基因重组技术克隆并表达iniB基因,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯度约98%的重组蛋白Rv0341,并分别把依R菌高表达的蛋白Rv0341 (天然蛋白Rv0341)、重组蛋白Rv0341和无关蛋白EspA-IL-24按常规进行SDS-PAGE,转移至NC膜后用1%BSA封闭并分别以临床依R菌肺结核患者和非依R菌肺结核患者的血清为一抗,HRP标记的羊抗人IgG为二抗进行Western blot,鉴定蛋白的反应原性及特异性。结果显示:天然蛋白Rv0341和重组蛋白Rv0341与依R菌肺结核患者血清反应均出现明显的棕黄色条带,呈强阳性反应;与非依R菌肺结核患者血清反应无棕黄色条带,呈阴性反应;而无关蛋白EspA-IL-24与依R菌肺结核患者、非依R菌肺结核患者血清反应均无棕黄色条带出现,呈阴性反应。结论重组蛋白Rv0341具有良好的反应原性及特异性,其编码基因亦相对保守,可用于依R菌结核病临床血清学快速诊断试剂盒的研发。

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 汪圣强;王柯;裴豪;;主动外排系统与结核分枝杆菌耐药[J];中国医学工程;2011年07期
2 王海全;;64例尘肺结核痰结核分枝杆菌培养药敏结果分析[J];中国医药指南;2011年21期
3 董海燕;张建中;万康林;;结核分枝杆菌毒力相关因子研究进展[J];医学研究杂志;2011年06期
4 黄志强;张日东;吴智龙;陈世浩;;新型改良罗氏培养基与罗氏酸基检测结核分枝杆菌比较[J];广东医学;2011年09期
5 吕中全;张明新;张慧;;荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的价值[J];新乡医学院学报;2011年04期
6 陈士东;;296例结核性脑膜炎临床分析[J];医学理论与实践;2011年13期
7 金法祥;王华钧;孙小军;;DNA环介导恒温扩增试验检测结核分枝杆菌的研究[J];中华医院感染学杂志;2011年12期
8 廖传玉;黄正谷;陈天刚;李同心;万东勇;饶霞;徐艳;侯毅;钟敏;严哓峰;;2004~2009年我中心结核分枝杆菌临床株耐药趋势[J];临床肺科杂志;2011年08期
9 张伟铮;黄彬;林冬玲;鄂顺梅;薛新娜;曾建明;陈茶;;结核分枝杆菌自身淬灭探针荧光定量PCR检测方法的建立[J];中国热带医学;2011年06期
10 王瑞博;井申荣;;结核分枝杆菌分泌蛋白TB10.4的功能和应用[J];生命的化学;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴园;钟敏;王易伟;钟静;胡频频;毛旭虎;;Rv0341用于诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病的研究概况[A];中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会论文集[C];2008年
2 戴广明;曹以诚;杜正平;陈洵;黄曙海;逄宇;周杨;黄海荣;赵雁林;;结核分枝杆菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测方法的构建[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
3 许优;孙惠平;张增贤;刘莉娜;;关于结核分枝杆菌定量方法的研究[A];中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编[C];2006年
4 刘毅;李卫民;田苗;孙照刚;李传友;周辉;张治国;高铁杰;高峰;;快速筛选定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法[A];2007年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2007年
5 张月新;辛毅;马郁芳;;结核分枝杆菌RmlB的表达、纯化及酶促反应动力学研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
6 刘焰;刘胜武;谈蓉;马立新;刘君炎;;结核分枝杆菌Ag85B与ESAT-6双顺反子重组腺表达载体的构建[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
7 张旭霞;张海青;李传友;田苗;赵冰;李卫民;张健源;印云青;焦扬;端木宏谨;;结核分枝杆菌黏附素HBHA防治结核病的动物实验研究[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年
8 陈曦;张宗德;刘忠泉;贾红彦;邢爱英;古书香;;结核分枝杆菌rv3873、rv3879c基因原核表达载体的构建和表达[A];中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编[C];2006年
9 周庆;方中飞;沈小英;宋冰;方孝美;;临床分离结核分枝杆菌的耐药性分析[A];2006年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2006年
10 陈涛;周琳;周杰;江勇;周志刚;彭建明;文力;彭东东;何超文;钟球;;环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的方法建立与临床应用评估[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 韩晓玲 通讯员 范敬群 金安江;华中农大研究成果获世界声誉[N];湖北日报;2009年
2 庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年
3 记者 陈青;让结核菌三天内原形毕露[N];文汇报;2009年
4 钱忠军;华中农大发现新基因有望控制结核病[N];江苏科技报;2009年
5 驻鄂记者 钱忠军 通讯员 金安江 范敬群;发现可能控制结核病的新基因[N];文汇报;2009年
6 记者 黄每裕;珠海推出两种检测试剂新产品[N];中国医药报;2009年
7 庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年
8 记者 项铮;团山会议研讨罕见病原体防治策略[N];科技日报;2009年
9 ;整合力量 抗击“瘟神”[N];中国医药报;2003年
10 宋心德;IDSA2基因导致结核杆菌产生抗药性[N];医药经济报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 董海燕;中国13省市结核分枝杆菌基因多态性分析[D];中国疾病预防控制中心;2011年
2 陈嘉臻;结核分枝杆菌特异的RD2/RD11蛋白应用于结核免疫诊断的研究[D];复旦大学;2009年
3 王平;肺分枝杆菌感染临床特征、耐药模式、预后研究及肺组织结核分枝杆菌巢式PCR检测[D];北京协和医学院;2011年
4 陈军;武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制的研究[D];华中科技大学;2011年
5 陈军;武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制研究[D];华中科技大学;2011年
6 乐军;耐药结核分枝杆菌的多维分析[D];复旦大学;2003年
7 孙勇;北京地区结核分枝杆菌耐药分子特点及结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物泵机制的初步研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2012年
8 刘凯;结核分枝杆菌潜伏感染者和初发结核病患者免疫分子标识的筛选[D];北京协和医学院;2010年
9 宋文刚;茜草素抗结核分枝杆菌作用机制的蛋白质组学研究[D];吉林大学;2007年
10 姜晓颖;北京地区结核分枝杆菌基因分型及与耐药性关系的研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年
2 王霞芳;IFN-γ增强BALB/c小鼠对结核分枝杆菌感染的抵抗力[D];苏州大学;2002年
3 曹立雪;应用膜芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
4 韩喜琴;噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌药物敏感性研究及评价[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年
5 王琳;结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究[D];西南大学;2010年
6 丁卫民;耐多药肺结核与结核分枝杆菌L型感染的临床研究[D];山西医科大学;2003年
7 吴玉敏;1.结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达 2.FTY720对肾移植受者治疗的安全性和有效性系统评价[D];兰州大学;2010年
8 佘茜;结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达及初步应用[D];重庆医科大学;2011年
9 申峻松;结核分枝杆菌lhp基因的原核表达及其产物的单克隆抗体研制[D];扬州大学;2008年
10 宋宇;结核分枝杆菌MurA的优化表达及功能分析[D];大连医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026