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重组结核分枝杆菌ESAT-6-CFP-10对人单核-巨噬细胞活化的影响

冯永红  刘忠华  丁元生  胡忠义  
【摘要】:目的检测重组结核分枝杆菌 ESAT- 6-CFP-10(rEC)对人单核-巨噬细胞活化的影响。方法人单核细胞株 THP-1细胞中加入 rEC 或等体积培养液,单独作用O~72 h 或者在 LPS (100ng/ml)或 IFNγ(50 U/ml)刺激作用18 h 后收集上清待测 TNF-α,流式细胞仪检测 HLA- DR、CD80、CD86、CD40表达。新鲜分离人 PBMC 贴壁法获取单核细胞,培养第1 d(早期给药)加入 rEC 后,于0~72 h 不同时间取上清检测 TNF-α,然后补加培养液继续培养;或培养第5 d 加入 rEC(晚期给药),早期及晚期给药组均在第 6 d 加入 LPS(100ng/ml)刺激18 h 后收上清检测 TNF-α,流式细胞仪检测细胞表面分子表达。统计采用组间配对 t 检验,P<0.05为有显著性差异。结果 rEC(5~20μg/ml)剂量依赖性地刺激 THP-1细胞释放 TNF-α,5、10、20μg/ml 分别引起(175±56)、(626±106)、(906±174)pg/ml TNF-α产生(对照为0)。rEC 刺激 TNF-α产生的作用有时间依赖性在6~8h 达高峰,48~72h 回降到基础值。rEC 刺激新鲜分离人单核细胞释放 TNF-α的反应与其在 THP-1上的作用类似。rEC 还与 IFN-γ协同性地诱导 TNF-α的产生及 HLA- DR 和 CD80的表达(刺激 TNF-α产生的量分别为 rEC:625±105,IFN-γ:718±86,rEC+IFN-γ: 2 231±991),rEC 诱导 TNF-α表达的作用可被 MAPK 信号通路抑制剂 U0126特异性地抑制。相反,rEC 持续作用(>72 h)可抑制巨噬细胞对 LPS 刺激引起的 TNF-α释放和细胞 HLA-DR 和 CD80的分子表达。结论 rEC 能刺激人单核细胞的活化,而其持续作用抑制人巨噬细胞对炎性刺激的反应可能与结核分枝杆菌的免疫逃逸有关。

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