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《中国毒理学会灾害与应急毒理学专业委员会第一次全国学术交流会论文摘要》2016年
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PARP-1敲降对芥子气损伤后HaCaT细胞的影响

刘峰  蒋宁  肖智勇  张小锐  程军平  周文霞  张永祥  
【摘要】:目的芥子气(SM)是一种糜烂性毒剂,由于其损伤机制复杂,作用机制至今尚未阐明,目前尚无特效抗毒剂,抗SM损伤药物一直是各国军事医学的研究重点。有文献报道聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂对SM所致皮肤损伤有治疗作用。本研究通过建立PARP-1敲降的永生化人表皮角化形成细胞(HaCaT)模型,考察PARP-1在SM损伤中的作用机制。方法采用慢病毒载体将PARP-1的shRNA转染进HaCaT细胞中,加嘌呤霉素筛选混合克隆细胞系,进而通过有限稀释法筛选并建立PARP-1敲降的单克隆稳转细胞系,利用RT-PCR及Westen印迹法检测PARP-1的敲降效率;在PARP-1敲降及对照的HaCaT细胞模型上,从细胞活力、凋亡及自噬相关通路等方面考察SM毒性及PARP-1在SM损伤中的作用机制。结果为确定PARP-1在HaCaT细胞上的敲降效率,首先检测了RNA干扰后HaCaT细胞中PARP-1 mRNA的含量。RT-PCR结果显示,与对照组相比,PARP-1敲降组能够显著降低HaCaT细胞的PARP-1 mRNA含量,与对照组相比降低了90%以上。另外,为在蛋白水平确认PARP-1的敲降效率,检测了RNA干扰后HaCaT细胞中PARP-1的蛋白含量。Western印迹法结果显示,PARP-1敲降能显著降低PARP-1蛋白含量。在PARP-1敲降及对照的HaCaT细胞模型上发现,SM损伤后PARP-1迅速激活、细胞活力明显降低。PARP-1敲降可显著降低PARP-1的表达,并能明显增加SM染毒组的细胞活力;SM染毒可通过激活pJNK、p-P53、Caspase 9、Caspase 8、c-PARP和Caspase 3等凋亡相关指标来增加细胞凋亡,PARP-1敲降能明显降低上述指标的激活并降低SM造成的细胞凋亡。另外,研究发现,SM染毒可明显降低自噬抑制通路Akt/mTOR的激活,而PARP-1敲降能显著增加SM染毒后Akt/mTOR通路的激活。结论 PARP-1敲降可减轻SM损伤,而调节细胞凋亡及自噬相关通路是其发挥保护作用的重要途径。
【作者单位】:军事医学科学院毒物药物研究所中药和神经免疫药理研究室抗毒药物与毒理学国家重点实验室
【关键词】:芥子气 PARP- 凋亡 自噬
【分类号】:R82
【正文快照】:
PARP-1敲降对芥子气损伤后HaCaT细胞的影响@刘峰$军事医学科学院毒物药物研究所中药和神经免疫药理研究室抗毒药物与毒理学国家重点实验室!北京100850 @蒋宁$军事医学科学院毒物药物研究所中药和神经免疫药理研究室抗毒药物与毒理学国家重点实验室!北京100850 @肖智勇$军

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1 赵凌舟;张华北;;抗肿瘤药物PARP-1抑制剂及其放射性核素标记的研究进展[J];同位素;2011年S1期
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