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《中国毒理学会第四届中青年学者科技论坛论文集》2014年
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人支气管上皮细胞放射损伤应答外泌体(exosome)的分离和非编码RNA鉴定

王豫  宋曼  关华  张学清  周平坤  
【摘要】:目的外泌体(exosome)是一种纳米级细胞来源的膜性囊泡状小体,直径约30~100nm,内涵蛋白、RNA等生物分子,并随细胞的功能状态受到外界环境因素影响而变化。外泌体作为一种亚细胞成分,在治疗肿瘤方面具有组成明确、活性稳定、安全有效和便于保存等优点,分离出细胞培养液中的外泌体,可以作为疾病诊断的标志物分子,是核辐射损伤的分子标志物。探讨外泌体在肿瘤免疫治疗方面的应用及进展对于发展新的肿瘤治疗策略具有着重要意义。方法研究采用正常人肺支气管上皮细胞,2Gyγ射线照射后,收集培养液上清中的外泌体成分,利用多次超速离心结合膜超滤的方法,分离纯化外泌体样小囊泡。2Gyγ射线照射人支气管上皮细胞4h和8h收集上清,通过miRNA芯片筛查有放射损伤诱发的外泌体miRNA分子。qRT-PCR方法检测miRNA可信性。结果采用透射电镜从形态学方面鉴定了分离纯化的2Gyγ射线照射人支气管上皮细胞收集的培养液上清的外泌体样小囊泡为外泌体。2Gyγ射线照射人支气管上皮细胞后收集4h和8h的培养液上清,通过miRNA芯片筛查有放射损伤诱发的外泌体miRNA分子,筛选出1898个成熟的miRNA,其中选择表达明显的5条miRNA,分别是:hsa-miR-100-5p,hsa-miR-1246,hsa-miR-7-5p,hsa-miR-29b-3p,hsa-miR-1280。对上述表达差异明显的miRNA进行分析,通过qPCR方法定量检测miRNA分子,结果验证4条miRNA的可信性。结论通过2Gyγ射线照射人支气管上皮细胞后,建立了分离外泌体的方法。构建外泌体miRNA的表达谱。由于外泌体具有介导免疫信号传递的功能,促进肿瘤血管新生和肿瘤转移,直接作用于肿瘤细胞等途径,影响肿瘤的进展。因此,放射诱发外泌体的产生及其在细胞放射损伤反应中的作用将是放射生物学研究中的一个新的领域。

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