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《第九届中国生物毒素学术研讨会论文摘要》2009年
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多种芋螺PDI酶基因的克隆

彭超  唐天乐  陈心  高炳淼  吴勇  朱晓鹏  郑晓冬  邴辉  罗素兰  
【摘要】:实验目的与意义:芋螺毒素是一类产自于芋螺的生物活性多肽,富含半胱氨酸,能高选择性地作用于多种离子通道及其亚型和神经递质受体,具有极高的研究和药用价值。化学合成或变性的芋螺毒素需要在芋螺PDI酶的作用下,才能高效地构成正确的二硫键构象,进行折叠,形成具有生物学活性的芋螺毒素。PDI酶既是一种折叠酶,同时也具有分子伴侣活性,对富含二硫键的芋螺毒素的生物学功能的形成至关重要。本实验通过分子生物学方法,克隆获得不同芋螺的PDI酶基因。材料方法:六种芋螺cDNA文库为本实验制备,并保存于-80℃,LA Taq酶和pMD19-T载体均购买自大连宝生物公司。以cDNA文库为模板,使用LATaq酶和设计的引物(上海生工合成)进行PCR扩增,筛选得到目的片段,将目的片段连接到pMD19-T载体后进行测序。结果与讨论:成功克隆到桶形芋螺、疣缟芋螺、织锦芋螺的PDI酶基因。另3种芋螺的PDI酶基因未能成功克隆,需准备质量较高的芋螺cDNA文库并改进实验方法。我们下一步将构建合适的表达载体,探索利用PDI酶在细胞内或体外催化芋螺毒素线性肽的氧化折叠。
【作者单位】:热带生物资源教育部重点实验室(海南大学)
【基金】:国家自然科学基金(30860368)
【分类号】:R99

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