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《中国草学会牧草育种专业委员会2007年学术研讨会论文集》 2007年
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正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

郑轶琦  王志勇  郭海林  薛丹丹  刘建秀  
【摘要】:本研究以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg~(2+)、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶四种因素三个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2μl 10×PCR buffer、60ng模板DNA、Mg~(2+)1.50mmol·L~(-1)、dNTP260μmol·L~(-1)、引物0.25μmol·L~(-1)、Taq DNA聚合酶0.5U,总体积为20μl。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg~(2+)浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰,多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学的依据。

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