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《中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)》2009年
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家蚕mago nashi基因的克隆、序列分析及原核表达研究

李文学  刘刚  柴春利  鲁成  
【摘要】:为阐明家蚕生殖发育的调控机制,在家蚕基因组、EST数据以及芯片数据分析的基础上,本文对果蝇中已报道的生殖质决定相关基因在家蚕中的同源基因进行了鉴定,从FlyBase下载果蝇生殖质形成相关基因18个,通过与家蚕基因组数据进行BLAST比对分析,发现13个基因在家蚕中均有同源基因,并对其表达模式进行了分析。然后对高度保守的mago nashi基因进行了克隆和原核表达。克隆的mago nashi基因完整的编码区序列为441bp,编码146个氨基酸残基。该基因位于nscaf2655上,只有一个完整的拷贝,在基因组上有1611bp,共有两个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT/AG规则。RT-PCR检测了该基因在发育各时期各组织器官的表达情况,发现该基因在所检测的所有发育时期、组织器官均有表达,是一个非特异表达基因。将家蚕mago nashi基因的编码区序列克隆到原核表达载体pET28-a中,并将构建成的pET-mago nashi重组质粒转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)细胞,IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测分析。结果表明,同对照相比,重组质粒在23.5KD处有一条十分明显的新增蛋白带,与预测的蛋白质大小一致,说明该基因体外重组表达成功。

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