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《第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集》2007年
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广西尖吻蝮蛇毒抗肿瘤组分的分离纯化及活性的研究

雷丹青  李映新  周先丽  
【摘要】:目的:从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种小分子多肽(K 组分).研究其对癌细胞株的诱导凋亡作用及其他抗肿瘤相关机制。方法:经 Sephadex G-75凝胶过滤,超滤和 DFAE Sepharose CL-6B 离子交换层析法从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化获得一种小分子多肽,采用 SDS-PAGE 鉴定纯度并测定分子量;采用 MTT 法和平板集落形成实验检测其对癌细胞株的生长抑制情况;应用 H.E 染色和透射电镜观察细胞形态学的改变,AO-EB 双荧光染色和流式细胞术(FCM)检测调亡的发生;PI 单染流式细胞术检测 K 组分对细胞周期的影响:通过细胞黏附实验检测对肿瘤细胞黏附能力的影响;观察 K 组分对人脐静脉血管内皮细胞株的生长抑制和黏附抑制作用,并建立鸡胚尿囊模型观察其抗血管生成的活性。结果:从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化出的具有抗肿瘤活性的小分子多肽,SDS-PAGE 鉴定其为单一组分,分子量为7862D 左右。该组分对肿瘤细胞增殖有不同程度的抑制,对人卵巢癌细胞株 A2780作用12、24、48h 的半数抑制浓度(IC50)分别为1.36μg/ml、0.814μg/ml、0.566μg/ml;对人胃癌细胞株 SGC-7901作用12、24、48h 的半数抑制浓度分别为8.38μg/ml、3.21μg/ml、1.38μg/ml。当剂量在0.2~1.2μg/ml 时,对 A2780的集落形成抑制率从24~87%,有明显的量-效关系。普通光学显微镜和透射电镜下观察到1.00μg/ml 的药物作用24h 后的 A2780细胞呈典型的凋亡形态学特征:细胞变小,细胞质浓缩,染色质边集碎裂,胞浆内出现空泡,细胞膜完整等:AO-EB 荧光双染色也发现0.8μg/ml 的 K 组分处理48h 后,有大量染色质浓染碎裂呈橙色荧光的凋亡细胞出现,FCM 检测发现,处理组细胞的早期凋亡率均显著高于对照组,浓度为0.8μg/ml 时,早期凋亡率达到高峰,在这之后,晚期凋亡和坏死细胞比例显著增加,早期凋亡细胞的存在不明显。K 组分能将 A2780 的细胞周期阻滞在 G2/M 期;能够剂量依赖性地抑制细胞同纤维连接蛋白(FN)的黏附;K 组分呈显著剂量依赖性抑制脐静脉内皮细胞株 ECV304增殖(作用24h 的 IC50为2.82μg/ml)和黏附及抑制鸡胚尿囊膜血管生成。结论:成功从广西尖吻蝮蛇中分离纯化出一种小分子多肽,具该组分有去整合素理化性质和生物学活性,且对肿瘤细胞有不同程度的抑制作用,其作用的机理可能是通过诱导细胞凋亡,抗细胞黏附和抗新生血管生成来实现的。

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