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《中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编》2010年
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RORα基因沉默对二烯丙基二硫诱导人胶质瘤细胞U251增殖的影响

凌晖  文玲  张峰华  夏红  董琳  周建国  
【摘要】:目的:本课题研究二烯丙基二硫(DADS)对胶质瘤U251细胞增殖的作用,并观察其对RORα蛋白表达的影响,进一步分析RORαmiRNA干扰对DADS处理前后U251细胞增殖的影响。方法:1.采用MTT比色实验、群体倍增时间分析分析DADS对人胶质瘤U251细胞的生长抑制效应;2.Western blot技术分析RORα蛋白的表达改变;3.将含靶向RORα的miRNA转染U251细胞,通过Western blot验证miRNA-RORα对RORα表达的抑制作用;4.MTT法检测和群体倍增时间分析RORα表达下调对DADS抑制胶质瘤细胞增殖的影响。结果:1.MTT比色实验结果显示,DADS浓度从15、22.5、30、37.5到45mg·L~(-1)处理人胶质瘤U251细胞,其对癌细胞增殖的抑制率从32.88%、41.83%、49.5%、59.42%到68.53%逐渐增强(P0.05)。2.U251细胞群体倍增时间为21.86h,而DADS处理后的细胞,细胞群体倍增时间延长至36.69h(P0.05)。3.Western blot分析灰度扫描显示,DADS处理人胶质瘤U251细胞24、48h后,RORα蛋白表达较未处理组明显上调(P0.05),且48h高于24h处理组(P0.05)。4.Western blot结果显示,转染RORα-miRNA组细胞的RORα蛋白表达明显低于转染negative-miRNA组和未转染组(P0.05)。5.MTT结果显示,RORα干扰24h组细胞增殖率(光吸收值)高于未转染组和转染阴性组(P0.05)。并且,干扰RORα表达可削弱DADS对U251细胞的增殖抑制作用,干扰RORα24h后加DADS的细胞增殖率(光吸收值)明显高于DADS处理的未转染组和转染阴性组(P0.05)。6.DADS处理后的各组细胞,细胞群体倍增时间都增长,其中转染RORα-miRNA组由处理前的15.50 h延长至处理后的17.27 h;但DADS对转染后的细胞增殖抑制作用弱于DADS处理未转染组(由21.86h延长至36.69h)与空载体转染组(由22.01h延长至36.03h)的抑制作用。结论:DADS可明显抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其作用可能与上调RORα蛋白表达有关;干扰至RORα表达明显下调后,可促进U251细胞增殖,并且抑制RORα表达可削弱DADS对U251细胞的增殖抑制作用,说明RORα参与DADS抗U251细胞增殖的作用。

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