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钙敏感受体在大鼠肺动脉平滑肌细胞的功能性表达及其在缺氧性肺动脉收缩中作用

李光伟  郭津  邢文婧  李鸿珠  郝静辉  白淑芝  李宏霞  席玉慧  张伟华  徐长庆  
【摘要】:目的:观察钙敏感受体(CaSR)在大鼠肺动脉平滑肌细胞的功能表达及其在缺氧性肺动脉收缩中的作用。方法:采用RT-PCR、western blot及免疫荧光技术测定大鼠肺动脉平滑肌CaSR mRNA和蛋白的表达及其细胞定位;采用组织浴槽血管环技术检测血管张力;激光共聚焦显微镜监视细胞内钙变化;流式细胞仪检测处于不同细胞周期的细胞比例;同时观察不同浓度Ca~(2+)和Gd~(3+)(CaSR激动剂)、10mM NiCl_2(Na~+-Ca~(2+)交换阻断剂)、0.2mM CdCl_2(L型Ca~(2+)通道阻断剂)、50μMU73122(PLC的特异性阻断剂)、50μMU73343(U73122的类似物)、10mM咖啡因(耗竭肌浆网内钙)、50μM thapsigargin(肌浆网钙泵抑制剂)以及急慢性缺氧对上述观察指标的影响。结果:正常大鼠肺动脉平滑肌细胞有CaSR mRNA及蛋白的表达,CaSR定位在平滑肌细胞的胞浆及胞膜;Ca~(2+)和Gd~(3+)呈剂量依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙及肌张力增加;CaSR激动剂引起的离体肺动脉环收缩及细胞内钙增加,不能被Na~+-Ca~(2+)交换阻断剂及L型Ca~(2+)通道阻断剂所取消;U73122、咖啡因及thapsigargin能抑制CaSR激动剂引起的肺动脉环的收缩,而U73343则无此作用;缺氧可使肺动脉平滑肌CaSR的表达增加、肺血管收缩增强和细胞增殖指数升高。结论:大鼠肺动脉平滑肌细胞有CaSR的功能表达,它可通过PLC-IP3信号通路引起细胞内钙增加和肺动脉收缩。CaSR表达增加在缺氧性肺动脉收缩中发挥重要作用,其机制与肺动脉平滑肌内钙增加和细胞增殖有关。

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