蛋白酶体抑制剂对ASPP家族表达的影响

【摘要】：目的:抑癌基因P53在调控细胞对化疗药物诱导DNA损伤的反应中发挥重要作用,ASPP家族是p53细胞凋亡功能的调节蛋白,其中ASPP1和ASPP2与p53结合后可增强该蛋白促进细胞凋亡的功能,发挥抑制肿瘤的作用,而iASPP却恰恰相反,它与p53结合后具有癌基因的功能。蛋白酶体介导的降解是调节p53功能的重要方式,本文研究蛋白酶体抑制剂对肺癌细胞株A549(P53野生型)和肺癌细胞株NCI-157(P53突变型)的ASPP蛋白家族表达及其对顺铂等诱导的细胞凋亡过程的影响。方法:MTT法筛选3种药物(顺铂,CDDP;吡柔比星,THP;蛋白酶体抑制剂,hdm2E3)以及联合用药(顺铂+蛋白酶体抑制剂;吡柔比星+蛋白酶体抑制剂)的最小有效浓度,初步检测各药物对A549和NC-157细胞的生长抑制情况;用MTT法筛选出的最小有效浓度处理两种细胞,24小时后流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;Western blot单独用药及联合用药处理24小时后,ASPP蛋白家族的表达情况;单独用药及联合用药处理24小时后,免疫沉淀法检测JNK/SAPK活性。实验数据用SPSS统计软件处理,均数比较用方差分析(ANOVA),非参数比较用Wilcoxon秩和检验,P0.01认为有统计学意义。结果:各处理组MTT检测结果显示:CDDP,THP对两类细胞的生长抑制作用均有良好的剂量依赖性,但hdm2E3对两类细胞的生长抑制作用无统计学意义(p0.01),CDDP+hdm2E3及THP+hdm2E3两种联合用药方式与单药用药相比,对A549和NCI-157的生长抑制作用无明显差异,且hdm2E3与CDDP及THP无交互作用(p0.01).FCM测定不同处理组细胞凋亡情况显示:CDDP,hdm2E3及CDDP+hdm2E3处理两种细胞后,引起的细胞早期凋亡率与对照组相比无明显差异,且彼此间差异也不明显;THP及THP+hdm2E3主要引起细胞坏死,上述药物引起的细胞早期凋亡或坏死在A549和NCI-157之间无显著差异(p0.01).Western Blot结果显示:上述药物处理24小时后,与各自的对照组相比,两类细胞ASPP1及ASSP2的表达均有不同程度的上调,iASSP的表达均有不同程度的下降。免疫沉淀结果显示与对照组相比,A549细胞经CDDP,hdm2E3及CDDP+hdm3E3处理24小时后,磷酸化的c-Jun表达明显增加。结论:CDDP,THP,hdm2E3单药用药及联合用药处理后ASPP1,ASPP2表达上调,而iASPP的表达下调,提示ASPP家族表达的变化是CDDP和THP抗肿瘤效应的机制之一。