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《国际心脏研究会中国分会第八届学术会议暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十一届学术会议论文摘要集》2004年
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抑制人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的siRNA的筛选和鉴定

单志新  林秋雄  余细勇  杨敏  邓春玉  郑猛  符永恒  谭虹虹  林曙光  
【摘要】:正目的:研究靶向MIF mRNA的siRNA对细胞内MIF表达的抑制作用,筛选出能有效抑制MIF表达的siRNA。方法:将MIF的真核表达载体pSecTag2C-MIF转染293细胞,用Zeocin加压培养,建立稳定表达MMIF的293细胞(293-MIF)株。设计4条靶向人MIF mRNA的候选siRNA,同时设计1条无关siRNA作为对照,利用T7 RNA转录试剂盒进行体外合成。用Oligofectamine分别将5条siRNA以200mM的浓度分别转染293-MIF细胞,48h后,行半定量RT-PCR检测MIF mRNA表达水平。分别构建上述5条siRNA的真核表达载体,用Lipofectamine2000分别将重组质粒转染293-MIF细胞,进一步鉴定表达载体介导的siRNA对MIF mRNA表达的影响。将能有效抑制MIF表达的siRNA表达载体转染293-MIF细胞后,与人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)共培养,用MTT法检测HUVECs的增殖情况,用半定量RT-PCR检测HUVECs中ICAM1的表达水平。

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