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《2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集》2012年
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组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1基因腺病毒载体的构建

吕文蕾  赵文  郑一超  徐瑞敏  马金莲  杨珂  刘宏民  
【摘要】:目的应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的重组腺病毒载体。方法采用分子克隆技术,在PC3细胞中提取RNA,利用RT—PCR技术克隆出LSD1基因的cDNA编码序列,先酶切连接插入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2,获得重组质粒后将其转入含有pAdEasy-1病毒骨架的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,获得重组子。经酶切鉴定后将该重组子转染入人胚胎肾细胞(HEK293细胞),经包装后获得含有LSD1基因的重组腺病毒。反复感染HEK293细胞扩增病毒,用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达。结果成功构建出含有LSD1基因的腺病毒载体,转染后的HEK293细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光蛋白表达,证明腺病毒载体pAd-LSD1构建成功,通过反复转染HEK293细胞以扩增病毒。结论成功构建LSD1基因的腺病毒载体,可以检测LSD1在诸多癌细胞中的表达。
【作者单位】:郑州大学药学院,郑州大学新药研究开发中心
【分类号】:R96

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