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《2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集》2008年
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BmK ANEPⅢ植物表达载体构建及根癌农杆菌转化条件考察

黄婷婷  来琳琳  王轶  张景海  宋永波  
【摘要】:目的构建东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)抗神经兴奋肽Ⅲ(anti-neuroexcitation peptide,ANEPⅢ)植物表达载体,并转化获得根癌农杆菌工程菌。方法以植物表达载体pBin438为母核,利用分子克隆技术构建含有启动子CaMV DE35S、Ω’翻译增强子、3’端含有内质网滞留肽SEKDEL编码区的ANEPⅢ目的基因和NOS终止子表达盒,得重组质粒pBI121-DE35S-ANEPⅢ。应用液氮冻融法、三亲杂交法、电击法转化根癌农杆菌EHA105,考察关键因素对转化效率的影响。结果成功构建ANEPⅢ植物双元表达载体pBin-ANEPⅢ和pBI121-DE35S-ANEPⅢ,并获得用于遗传转化的工程菌pBI121-DE35S-ANEPⅢ/EHA105。结论本实验在植物表达载体中加入几种调控元件,为实现提高转基因植物表达外源蛋白量增加可能性。

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