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《第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编》2006年
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应用RNAi技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达

沈建军  刘家云  苏明权  缪应业  张青  郝晓柯  
【摘要】:目的:用siRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体,并转染前列腺癌细胞系 PC3,通过RNA干扰(RNA interference RNAi)阻断PC3细胞中sur- vivin基因的表达,并研究survivin基因沉默后对PC3细胞的凋亡产生的影响。方法:将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSileneerTM3.1-H1 neo线性质粒用T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切及DNA测序鉴定后,用脂质体法转染PC3 细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验检测Bur- vivin的表达变化,并用流式细胞技术检测转染后PC3细胞的凋亡变化,MTT法检测细胞生长速度的变化。结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体。RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验表明,pSilencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3重组载体有效地阻断了PC3细胞中survivin基因的表达,survivin基因在 mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P0.01),转染后PC3细胞的凋亡增加了10-15%,细胞生长速度明显变慢。结论:成功的构建了针对survivin基因的真核转录载体pSilencer3.1-SVV2、pSi- lencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3,后二者可有效的阻断前列腺癌细胞系PC3细胞中survivin基因的表达,并使转染后PC3细胞的凋亡增加了10-15%,细胞生长速度明显变慢。。

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