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《第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编》2006年
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甲状腺转录因子-1真核载体的构建和体外表达

程烽  盛燕  潘春明  陈漪  施静艺  刘智  白雪涛  宋怀东  
【摘要】:根据已知的甲状腺转录因子-1(TTF-1)基因序列,应用巢式PCR技术,从人肺腺癌细胞株SPC-A1中扩增出TTF-1基因。通过TA连接将其克隆入pGEM-T easy载体,经测序鉴定后, 双酶切插入真核表达质粒pcDNA 3.1/myc-His(-)C中。重组质粒经Xho I和BamH I双酶切鉴定后,进行蛋白质体外转录翻译。电泳迁移率变动分析(EMSA)验证获得的体外翻译蛋白TTF-1具有与下游靶基因UGRPI启动子结合的能力。上述结果表明,重组质粒pcDNA 3.1-TTF-1能在体外表达出具有生物活性的TTF-1蛋白,为进一步研究TTF-1蛋白与相应的DNA反应元件及其它转录因子的相互作用奠定基础。

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