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《第二届全国不育症研讨会论文汇编》2007年
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人卵母细胞周围的颗粒细胞调亡与胚胎质量的关系研究

林金菊  葛红山  徐炳森  韩仅香  
【摘要】:目的:探讨在药物性超排卵的体外受精中,人卵母细胞周围的颗粒细胞调亡与胚胎质量的关系。方法:随机选择因男性因素,需做单精子卵浆内注射的不孕患者15例。女方年龄35岁,月经周期规律,血中基础性激素水平正常。所有患者都采取黄体期长方案 GnRH-a/r-FSH/HCG。共采集239个卵母细胞,从卵泡液中将卵丘卵母细胞复合体(COC),移入 HEPES 培养液中,冲洗数遍后移入 FM 培养液,置入37℃,5%二氧化碳培养箱内,体外培养3小时。在40倍显微镜下,将 COC 移入40-50U/ML 透明质酸酶溶液中(HEPES)中消化30S,用玻璃细管机械吹打,剥去卵母细胞上的颗粒细胞,将剥卵液移入指形管。经150G 离心5MIN,去除上清液后加入 HEPES 混均后继续离心一遍,再加入新鲜 HEPES,立即将颗粒细胞采用流式细胞技术进行凋亡检测。PBS 洗涤细胞,用 1:4稀释的 binding buffer 重悬并调整细胞浓度2×10~5/ml;195μl细胞悬液加5μlAnnexinV-FITC;混匀, 室温孵育10min;PBS 洗涤细胞,190μl binding buffer 重悬细胞;加入10gl 20gg/ml 的 PI,4℃避光孵育 10min。将卵子移入经平衡过液的培养液继续培养,选择有第一极体的成熟卵母细胞进行单精子卵浆内注射(ICSI)受精。16-18小时后,将正常受精胚胎继续培养24小时,根据胚胎的形态与无核碎片进行胚胎分级,无核碎片5%为 A 级;卵裂球均匀或轻度不均匀,无核碎片5.20%为 B 级;卵裂球轻度不均匀,无核碎片20%为 C 级。结果:239个卵母细胞,其中 MII 218个、MI 与 GV21个(13、8),每个卵母细胞的颗粒细胞凋亡数与凋亡率分别为:823.6±827.8、22.6±14.1;1628.1±949.2、37.1±15.1,受精率74.3%(162/ 218),卵裂率97.5%(158/162)。共形成158个胚胎,其中 A 级40个,B 级69个,C 级49个。各级胚胎细胞凋亡数与凋亡率分别:674.6±795.9、20.3±13.6;770.1±779.7、21.7±12.9;1204.4±859.6、 30.3±13.2。A 与 C 级、B 与 C 级比较有显著差异(P:0.002、0.001、P=0.005、0.001);A 与 B 级无统计学差异(P0.05)。结论:人卵巢内卵母细胞周围的颗粒细胞凋亡状态与胚胎质量有直接的关系,研究卵母细胞颗粒细胞凋亡率,可以预测胚胎的发育潜能,为今后选择优质胚胎移植,提高种植率、妊娠率、减少多胎率有一定的临床价值。

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