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《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》2004年
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免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞

徐小明  窦忠英  华进联  葛秀国  
【摘要】:用免疫外科法从45枚BALB/c小鼠囊胚中分离得到20枚去除滋养层细胞的ICM,接种在MEF饲养层上,使用DMEM(高精)+15%FBS+0.1mMβ-巯基乙醇+0.01mM非必需氨基酸+1000IU/mlLIF+100IU/mL青霉素+100IU/ml链霉素培养液,17枚形成典型的ICM集落(85.0%),有一枚胚胎传至第10代。用于全胚培养的BALB/c小鼠胚胎共102枚,使用与免疫外科相同的培养方法,66枚形成典型的ICM集落(64.7%),其中一枚胚胎传至第8代。结果表明,免疫外科法较全胚培养法有利于小鼠ES细胞的分离与克隆;添加LIF(1000IU/ml)有利于小鼠ES细胞的分离与传代(P0.05);0.05%胰酶+0.008%EDTA是较好的ES细胞消化液,对细胞综合损伤力小,且传代后ES细胞集落形成能力也较高(P0.05)。分离得到的ES细胞经形态学观察,AKP染色,体外分化实验,核型分析等证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。

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