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《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》2004年
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人类羊水源类ES细胞多能性干细胞的分离培养

华进联  刘雨潇  董武子  窦忠英  
【摘要】:干细胞具有自我更新和多向分化潜能,是形成机体多种组织器官的祖细胞。按其来源,可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是由早期胚胎内细胞团(Inner cellmass,ICM)或原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)分离而来的多潜能细胞,ES细胞是研究哺乳动物早期胚胎发生、细胞组织分化、基因表达调控等发育生物学基础研究的一个非常理想的模型系统和非常有用的工具,也是进行动物胚胎工程研究、生产和临床医学研究的一个重要途径。干细胞可望用于治疗中风、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、背髓损伤、糖尿病等重大疾病。但由于ES细胞研究的伦理学、免疫排斥问题和建系难等问题制约着ES细胞的应用,需要探寻机体其他来源的多能性干细胞。羊水细胞培养是产前诊断胎儿先天性遗传疾病的经典方祛。羊水细胞的培养已经成功,最近,研究表明可能含有一些具有多能性干细胞特性的细胞,羊水细胞可用于矫正某些类型的出生后胎儿的先天性缺陷疾病,还可能提供胎儿干细胞供研究和治疗之用。无自收集怀孕20-30周龄胎儿羊水,采用类似人类ES细胞的分离培养方法,即以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)或人胎儿成纤维细胞(HEF)等作饲养细胞层,Knock-out DMEM(Gibco)或DMEM(高精)+15%KSR(Knock-out serum replacement)或15%FBS(胎牛血清)+0.1mmol/L 2-巯基乙醇等为基础培养液,添加LIF、SCF、bFGF为培养液,分高培养的部分羊水细胞具有ES细胞特性,细胞克隆形成集落,细胞结构致密,界限不清,部分细胞AP、OCT-4、SSEA-1免疫组化染色阳性。AP、OCT-4、SSEA-1等均为胚胎性多能性干细胞的特异性标志,尤其cot-4为维持干细胞多能性的特异性标记。结果表明,羊水细胞可能是胚胎性多能性干细胞的又一个潜在来源和途径,其可能来源于脱离正常迁移定居路途的原始生殖细胞(PGCs)或为间质干细胞或上皮干细胞的祖细胞。羊水源胚胎性多能性干细胞的发现可以避免人类ES细胞研究的论理学问题,可为胎儿和人类重大疾病的治疗提供大量的种子细胞。

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