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《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》2004年
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人类胚胎生殖细胞的分离培养

华进联  徐小明  杨玉艾  刘雨潇  李松  窦忠英  
【摘要】:本研究收集4~13周龄(w)人流产胎儿分离PGCs,以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)或人胎儿成纤维细胞(HEF)等作饲养细胞层,Knock-out DMEM(Gibco或DMEM(高糖)+15%KSR(Knock-out serumreplacement)或15%FBS(胎牛血清)+0.1mmol/L 2-巯基乙醇+2mmol/L谷氨酰胺+0.1mmol/L非必需氨基酸+1mmol/L丙酮酸钠为基础培养液,部分添加LIF(10ng/ml)、SCF(15ng/ml)+bFGF(4-10ng/ml)为培养液,获得了具有小鼠ES细胞或EG细胞特征的人类EG细胞。该类细胞呈AP、PAS、OCT-4阳性;SSEA-1,3,4,TRA-1-60,TRA-1-81阳性;可冷冻保存;最高传至14代;体外可自发分化为类胚体、成纤维细胞样细胞、上皮样细胞、神经样细胞及心脏跳动样细胞团等。结果表明7~12周流产儿适于人类胚胎生殖细胞的分离克隆;人类胚胎生殖细胞体外培养以添加15%FBS为宜;添加4ng/ml LIF+4ng/ml beFGG+20ng/mL SCF能明显改善人类胚胎生殖细胞的分离克隆;MEF、STO、bEF、hEF可提高人原始生殖细胞(PGCs)的贴壁率,能促进PGCs源的人类胚胎干细胞(ES细胞)的分离效率,以MEF作为饲养层效果较好。

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