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《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》2004年
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牛ntES细胞核在MetaphaseⅡ去核卵中重排及其核移植融合卵的发育

黄雅娟  柏学进  李建栋  程明  
【摘要】:本研究以大型荷斯坦奶牛6岁成体耳尖细胞(成体耳尖组)和妊娠60d胎儿成纤维细胞(胎儿成纤维组)为核供体细胞构建核移植重构卵,将所获得的克隆囊胚在体外进行分离抑制培养,以获得的“ntES”细胞进行核移植,并对相同基因型不同来源的核供体细胞克隆进行了比较。结果,核移植卵2-cell期的卵裂率成体耳尖组为84.5%(300/400)极显著高于胎儿成纤维组的70%(326/464)(P0.01),4-cell期率两者间差异不显著,桑椹胚和囊胚发育率胎儿成纤维组的分别为40.5%(188/464)和17.2%(80/464)极显著高于成体耳尖组的31.6%(112/300)和9.3%(33/355)(P0.01)。胎儿成纤维组获得的2个“ntES”干细胞集团(NT01FeS组)与成体耳尖组获得的1个“ntES”干细胞集团(NT02EaT组),再次进行核移植试验给果,其融合卵率、卵裂率及囊胚发育率间差异不显著,桑椹胚率NT01FeS组为58.1%(128/220),显著高于NT02EaT组的47.6%(100/210)(P.05),囊胚细胞数NT01FeS组为133±5.6,极显著高于NT02EaT组的111±2.1(P0.01)。将NT01FeS组第7天的克隆桑椹胚和囊胚每2-3枚装入一支0.25mL塑料细管中,移植给同期发情处理的5头受体奶牛,30d时检查有3头受体妊娠(60%),60d时检查只有1头(20%)受体妊娠。胎儿成纤维组和来自于该组的具有同基因型的“ntES”细胞NT01 FeS核移植试验结果,其融合卵率、囊胚发育率之间差异不显著,但是,囊胚细胞数后者为133±3.6,极显著高于前者的108±1.4(P0.01);成体耳尖细胞和来自于该组的具有相同基因型的“ntES”细胞NT02 EaT核移植试验结果,其融合卵率间差异不显著,后者囊胚发育率和囊胚细胞数分别为18.6%(39/210)和111±2.1,极显著高于前者的9.3%(80/464)和98±3.3(P0.01)。试验结果表明:①核供体细胞分化程度对核移植囊胚发育率有显著影响;②携带相同基因型的不同类型核供体细胞核DNA在MⅡ期卵细胞质中的程序化重排存在差异,特别是对其核移植囊胚的细胞数有极显著性影响:③利用来自于高度分化体细胞的“ntES”细胞进行核移植可显著提高体细胞核移植重构卵的囊胚发育率及囊胚细胞数。

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