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《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》2004年
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表达传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因和新城疫病毒F基因重组禽痘病毒构建及其免疫效力初步研究

智海东  王云峰  王玫  孙永科  王利丽  张绍杰  童光志  
【摘要】:随着集约化养殖发展,呼吸系统疾病的预防越来越重要,其中传染性喉气管炎(ILT)和新城疫危害严重,而且现有的疫苗有一定的不足,导致疾病防制非常困难。因此,对于疫病的防制寄希望于新型疫苗。禽痘病毒表达系统是表达禽类病原基因的理想载体,到目前为止,已经有多种禽类病原的免疫原基因在禽痘病毒载体上被表达,多数都取得理想的保护效果,但如果该载体能够病原体的保护原性基因,将进一步扩大其保护范围,避免疫苗多次免疫的应激,节约防疫成本,可以改善禽类疫病防制现状。本研究以含有传染性喉气管炎病毒(LTV)gB基因的重组禽痘病毒载体为基础,构建含有ILTV gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因禽痘病毒转移载体pSY-gB-F,采用脂质体转染禽痘病毒S-FPV-017感染的鸡胚成纤维(CEF)细胞后,通过蓝斑试验筛选出重组禽痘病毒(rFPV-gB-F),并进行了6轮蚀斑纯化。Western-blot试验和间接免疫荧光试验分别表明ILTV gB基因和NDV F基因在rFPV-gB-F感染的CEF细胞中获得表达。为检测重组禽痘病毒rFPV-gB-F对SPF鸡的保护效果,将四周龄SPF鸡分为六组,分别免疫rFPV-gB-F(20只)、ND弱毒疫苗(La Sota,10只)、ILT弱毒疫苗(10只)、rFPV-ILTVgB(10只)、S-FPV-017(14只),并设立非免疫鸡(14)作为对照,另外两个小组分别免疫接种rFPV-gB-F组免疫剂量的1/102(6只)和1/104(5只)作为新城疫的攻毒对照,在免疫前、后两周每周采血,分离血清进行抗体检测。免疫后四周,以102ELD50 ND强毒对rFPV-gB-F免疫鸡(10只)、La Sota免疫鸡(10只)、S-FPV-017免疫鸡(7只)以及非免疫对照鸡(7只)进行肌肉注射攻击,La Sota免疫鸡完全保护,S-FPV-017免疫组和非免疫对照组全部死亡。FPV-gB-F免疫组的鸡有部分鸡(3/10)抵抗ND强毒的攻击,而另外的免疫剂量组分别有4/6,1/5存活,而且整个免疫鸡的发病死亡时间滞后。rFPV-gB-F免疫后而且没有产生血凝抗体,可以检测到微弱的抗新城疫病毒的抗体,但明显低于La Sota免疫组,新城疫强毒攻击后,抗体水平升高,可以检测到血凝抗体。新城疫弱毒疫苗免疫后,其血凝抗体在免疫后的一周可以检测到。免疫后四周用105 EID50 ILT强毒对rFPV-gB-F免疫鸡(10只)、ILT弱毒疫苗免疫鸡(10只)、FPV-ILTV gB免疫鸡(10只)、S-FPV-017免疫鸡(7只)以及非免疫对照鸡(7只)攻击,结果非免疫对照鸡和S-FPV-017免疫鸡全部7/7发病。结果重组病毒和ILT弱毒疫苗免疫鸡对喉气管炎强毒攻击保护相似,分别为rFPV-ILTV gB(8/10)rFPV-gB-F(7/10),弱毒疫苗(8/10)。rFPV-gB-F、rFPV-ILTV gB免疫后诱发抗ILTV抗体,二者水平相当,在免疫后三周呈阳性,但低于ILT弱毒疫苗免疫组,在病毒攻击后,抗体滴度迅速升高。而且病毒的分离结果表明重组病毒可以抑制喉气管炎的复制。本研究的结果初步表明重组三价疫苗可以对喉气管炎和新城疫强毒的攻击提供保护,表明rFPV-gB-F可以作为研制基因工程疫苗的侯选毒株,有关重组病毒的免疫效力应该进行进一步的研究。

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