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《第二届热带亚热带植物资源的遗传多样性与基因发掘利用研讨会论文集》2006年
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精确预测(AFC):一种新颖快速高效分离微卫星的方法

王化坤  房经贵  高志红  娄晓鸣  沈志军  章镇  
【摘要】:我们研究了一种新颖快速高效分离微卫星的方法——精确预测法。使用两种可识别不同序列却产生相同悬垂尾巴的两种内切酶:Mbo Ⅰ和Fba Ⅰ来共消化基因给DNA,这样DNA消化更完全, 并可连上一个相同的接头;优化磁珠吸附过程以富集微卫星;提出了精确预测模型并编写数据库软件“Accurate Forecast Microsatelfite 1.0”。通过一个巢式PCR来检测阳性克隆,数据输入软件,选择推荐列表中的前15个送出测序。所有的序列都是唯一的,含有微卫星和两侧可设计引物的序列。与亲和捕捉法、双抑制PCR法相比,AFC具有65%的SSR富集效率,避免了无效序列,操作简便、成本低。它将成为一种有效的SSR分离方法,特别是对非模式植物。

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