收藏本站
《动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集》2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

共存于厌氧真菌分离培养液中瘤胃甲烷菌的检测及其多样性分析

成艳芬  毛胜勇  裴彩霞  刘建新  朱伟云  
【摘要】:正反刍动物瘤胃内栖息着各种微生物,包括瘤胃细菌、原虫、厌氧真菌和甲烷菌。这些微生物互相作用、互相影响,在瘤胃内形成一个复杂的降解饲料、给宿主动物提供挥发性脂肪酸和微生物蛋白的生物群落。甲烷是瘤胃微生物代谢的终产物之一,它的产生是能量的损失,也是温室气体之一,因此瘤胃产甲烷菌的研究越来越受到重视。但是,瘤胃内产甲烷菌不能利用复杂的有机物作为能量来源,只能利用瘤胃细菌、原虫、厌氧真菌降解有机物产生的H2、CO2、甲酸等生成甲烷。目前,关于厌氧真菌与瘤胃甲烷菌的研究很少,现有的研究仅局限于单一厌氧真菌与单一产甲烷菌的共培养,而与厌氧真菌共存的瘤胃产甲烷菌的种类及其多样性研究则鲜有报道。此外,在瘤胃厌氧真菌分离培养过程中,常使用抗生素如青霉素、链霉素抑制瘤胃细菌的生长,可达到富集培养的目的,而瘤胃甲烷菌由于其特殊的细胞壁结构,对青霉素、链霉素不敏感,并且能利用真菌的发酵产物如H2、CO2、甲酸等产生甲烷。在目前研究现状的基础上,本研究先通过传统分离培养方法利用厌氧真菌培养基和青霉素、链霉素从山羊瘤胃获得瘤胃厌氧真菌和产甲烷菌菌群混合物,该混合物每3~4d传代1次,选择用于分离该混合菌群的瘤胃液及第5、15、25、35、45、55、62代培养液为材料,抽提总DNA,利用古菌通用引物对16S rRNA进行PCR扩增,扩增产物利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)分析古菌在传代过程中多样性的变化, 并利用软件分析各样品DGGE图谱的相似性。同时对样品中古菌16S rDNA进行克隆,并利用四种限制性内切酶Taq Ⅰ、Xho Ⅰ、Hin dⅢ、Hin f Ⅰ对所得69个克隆进行酶切多态性分析(RFLP),根据RFLP 分析结果对具有代表性的克隆序列进行测序及系统进化分析。DGGE结果显示,从厌氧真菌分离至第 45代,甲烷菌多样性指数由1.32降至0.99,相似性最低为34.7%;第45代至62代,多样性指数由0.99 升至1.15,相似性最低为89.2%。RLP多态性分析69个克隆共得到5个操作分类单元,选择其中6 个具有代表性的序列进行测序。序列及系统进化分析表明,属于其中3个操作分类单元的克隆最相似菌都是Uncultured arehaeal symbiont PA202,相似性均为95%,没有与这些克隆相似性较高的已培养甲烷菌:属于另外2个操作分类单元的克隆最相似菌都是Uncultured lumen methanogen 956,相似性均为97%, 最相似已知菌为Methanobrevibacter sp.NT7,相似性为97%。上述结果说明,该培养液中存在目前尚未分离培养的瘤胃甲烷菌。

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 成艳芬;毛胜勇;朱伟云;;厌氧真菌生态作用及其分子生物学研究进展[J];生物技术通报;2007年01期
2 郭雪峰;李华伟;李长青;金海;卢德勋;永西修;栗原光规;;内蒙古白绒山羊不同放牧期瘤胃甲烷菌mcrA基因的RFLP分析[J];山西师范大学学报(自然科学版);2008年03期
3 李长青;金海;栗原光规;;不同饲养条件下内蒙古绒山羊瘤胃甲烷菌组成的研究[J];华北农学报;2010年05期
4 谭强来;姜淑英;陈廷涛;汪孟娟;熊顺强;魏华;徐国茂;万翠香;;2株动物微生态制剂菌的分离鉴定及其生物学特性初步研究[J];中国微生态学杂志;2010年12期
5 姚文,朱伟云,韩正康,Antoon D L Akkermans,Barbara Williams,Seerp Tamminga;应用变性梯度凝胶电泳和16SrDNA序列分析对山羊瘤胃细菌多样性的研究[J];中国农业科学;2004年09期
6 王金全,蔡辉益,周岩华,刘国华,张姝,印遇龙;小麦日粮非淀粉多糖和木聚糖酶对肉仔鸡肠道微生物区系的影响[J];畜牧兽医学报;2005年10期
7 张春梅;易贤武;苑志朋;刘建新;;富含十八碳不饱和脂肪酸的植物油对体外瘤胃发酵和甲烷生成的影响[J];畜牧与兽医;2009年12期
8 赵一广;刁其玉;邓凯东;刘洁;姜成钢;屠焰;;反刍动物甲烷排放的测定及调控技术研究进展[J];动物营养学报;2011年05期
9 马俊孝;孔健;季明杰;;一种适于微生物多样性分析的青贮饲料总DNA的提取方法[J];生物技术;2009年01期
10 王新峰;冷青文;李志远;刘云芳;;低聚糖对断奶羔羊瘤胃菌群的影响[J];动物营养学报;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 成艳芬;毛胜勇;裴彩霞;刘建新;朱伟云;;共存于厌氧真菌分离培养液中瘤胃甲烷菌的检测及其多样性分析[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年
2 奚晓琦;王加启;卜登攀;栾广春;于萍;刘开朗;魏宏阳;周凌云;;DGGE技术及其在瘤胃微生物多样性研究中的应用[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
3 成艳芬;毛胜勇;MK Theodorou;朱伟云;;厌氧真菌活力及传代频率对真菌与产甲烷菌共培养液代谢与菌群的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 ;A method for casting denature gradient gel in DGGE analysis[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
5 潘康成;陈正礼;崔恒敏;冯兴;盛琴;赵爽;;利用ERIC-PCR和PCR-DGGE技术分析喂服枯草芽孢杆菌肉鸡肠道菌群的多样性[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
6 孙云章;毛胜勇;姚文;朱伟云;;底物不同木质素含量对瘤胃厌氧真菌附着及发酵特性的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
7 孙云章;毛胜勇;姚文;朱伟云;;瘤胃厌氧真菌对木质素含量不同底物的附着及发酵特性研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(上册)[C];2004年
8 郭嫣秋;胡伟莲;刘建新;;瘤胃甲烷菌及甲烷生成的调控[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
9 姚文;毛胜勇;朱伟云;韩正康;Antoon D.L.Akkermans;;应用变性梯度凝胶电泳技术和16S rDNA序列分析技术研究山羊瘤胃细菌的多样性[A];第四届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2002年
10 孙云章;毛胜勇;陈洁;周利芬;朱伟云;;瘤胃厌氧真菌对木质素含量不同底物的附着及发酵特性研究[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 鼎新;沼气池中猪粪难发酵怎么办?[N];长治日报;2005年
2 安徽省六安市裕安区能源办 陆永成;沼气池中猪粪难发酵怎么办[N];农民日报;2002年
3 陆永成;沼气池中猪粪为啥难发酵[N];农民日报;2003年
4 ;中药对反刍动物瘤胃微生物的影响[N];中国畜牧兽医报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 魏勇;规模化猪场粪污细菌总DNA DGGE指纹图谱及耐药性分析[D];四川农业大学;2011年
2 成艳芬;厌氧真菌与产甲烷菌共培养系统的建立及其代谢与菌群变化的研究[D];南京农业大学;2008年
3 孙云章;不同底物下瘤胃微生物的发酵特性及细菌菌群变化的分子描述[D];南京农业大学;2005年
4 郭雪峰;内蒙古白绒山羊甲烷产生量估测模型的建立及其影响因素的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
5 潘康成;产酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及对肉鸡的微生态效应研究[D];四川农业大学;2009年
6 张俊忠;东祁连山高寒草地土壤真菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
7 张俊忠;东祁连山高寒草地土壤真菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 张春梅;植物油及十八碳不饱和脂肪酸对瘤胃甲烷生成和微生态的影响[D];浙江大学;2008年
9 周亚文;添加延胡索酸二钠对湖羊瘤胃发酵和菌群结构的影响[D];浙江大学;2011年
10 段智勇;反刍动物日粮中淀粉与纤维的组合效应及其机理的研究[D];浙江大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘军花;自然结合的厌氧真菌与甲烷菌共培养物体外代谢特性及产乳酸潜力的初步研究[D];南京农业大学;2009年
2 李建东;鸭鱼养殖系统细菌多样性的研究[D];湖南农业大学;2010年
3 毛胜勇;山羊瘤胃及粪便中厌氧真菌的营养作用研究[D];南京农业大学;2001年
4 周利芬;厌氧真菌粗酶制剂的研制及应用研究[D];南京农业大学;2004年
5 宝立群;部分驱除瘤胃厌氧真菌对不同粗饲料体外发酵和瘤胃尼龙袋干物质降解率的影响[D];内蒙古农业大学;2002年
6 杨德君;甘露寡糖对兔肠道微生态影响的研究[D];湖南农业大学;2008年
7 张艳英;高效纤维素酶瘤胃厌氧真菌的筛选及其对纤维物质利用的研究[D];内蒙古农业大学;2009年
8 杨金龙;瘤胃厌氧真菌的筛选、诱变及发酵麸皮的研究[D];四川农业大学;2006年
9 张宇喆;山药多糖对大鼠盲肠微生物区系和免疫功能的影响[D];华中农业大学;2008年
10 侯志高;不同精粗比日粮对奶牛机体氧化应激和瘤胃内环境稳定性的影响[D];山东农业大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026