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《山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集》2006年
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截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达

王志宇  王健伟  何深一  吴围屏  韩金祥  洪涛  
【摘要】:目的 A组轮状病毒(RV)的组特异性抗原(VP6)片段,为发展RV免疫检测技术提供材料。方法以pcDNA3.1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX-5X,在E.coli中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。通过改变宿主菌、培养基,IPTG浓度和培养温度等条件,提高目的蛋白的可溶性表达水平,使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化。结果选定VP6氨基酸12-143片段为目的蛋白,PCR扩增其396bp的编码基因片段,构建出pGEX-5X-VP6-1。将该重组质粒转化E-coli后,SDS-PAGE和 Western blotting分析均显示,含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST::VP6-1在E.coli中获得高效表达,可占菌体总蛋白的30%。该蛋白主要以包涵体形式存在,经条件优化,最终通过低IPTG浓度、低温诱导提高了重组蛋白的可溶性表达水平,GST亲和层析可对其进行初步纯化。结论:VP6-1蛋白在E.coli中可被高效表达和纯化,为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于发展免疫检测方法打下了基础。

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【共引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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【相似文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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3 张淑华;心肌型脂肪酸结合蛋白的原核表达与应用研究[D];吉林大学;2006年
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6 王力;金丝桃素合成酶的基因克隆、表达及其酶学性质研究[D];中国农业大学;2005年
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8 罗丹丹;鸭瘟病毒UL47基因转录时相分析及主要抗原域的原核表达和抗体制备[D];四川农业大学;2010年
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10 李正平;猪流感病毒H_3N_8亚型NA基因的克隆和原核表达及间接ELISA方法的建立[D];华中农业大学;2010年
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