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《山东省药学会第一届学术年会论文集(下)》2005年
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南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ在毕赤酵母中的表达和活性的初步测定

张宁  王凤山  孙汶生  马春红  梁晓红  
【摘要】:以酵母表达质粒pGAPZαA为载体,构建含有CMTI I全长基因的重组酵母表达质粒pGAPZαA-CMTI I,重组质粒分别以PCR及测序鉴定正确后大量制备,然后用Bln I将其线性化, 电转化巴斯德毕赤酵母GS115,通过Tricine-SDS-PAGE及特异性PCR扩增法对酵母阳性重组子进行筛选,筛选获得的阳性菌表达产物较空白菌表达产物在3.0-4.0kD处有一条明显的条带,高效阳性菌目的蛋白表达量占分泌总蛋白的6.21%:对表达产物进行初步抑制活性的测定,结果表明阳性重组菌的表达产物具有抑制胰蛋白酶活性的作用。这一研究说明在毕赤酵母菌中可以分泌表达有生物活性的CMTI I蛋白。

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