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《2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集》2017年
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α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78的酶学性质表征及水解芦丁能力的分析

史云璐  李彬春  李艳琴  
【摘要】:α-L-鼠李糖苷酶(α-L-Rhamnosidase)能够专一催化水解芦丁、橙皮苷和柚皮苷等末端的α-L-鼠李糖基,生成L-鼠李糖。在工业上,具有脱去果汁中柚皮苷的苦味、使橙皮苷晶体造成的饮品浑浊澄清、增加葡萄酒的香气、生产甜味剂等作用。在医学上,可水解许多末端含有α-L-鼠李糖基的天然化合物,水解后的产物作为药物前体来改善药物特性等等。该酶广泛存在于动物组织,植物,酵母,真菌和细菌中。芦丁经α-L-鼠李糖苷酶作用后,生成异槲皮素和L-鼠李糖。异槲皮素具有与芦丁相似的生理功能,且比芦丁更容易吸收,效果更明显,具有更好的市场前景,其市场价格是芦丁的1000倍以上。因此,将芦丁转变为异槲皮素,可使其生物学活性最大化和多样化,从而提高其利用价值。HFM-Rha78为本实验室克隆、表达、纯化获得的α-L-鼠李糖苷酶,本实验以对硝基苯酚α-L-鼠李糖苷(pNPR)为底物,用紫外-可见光分光光度计分析反应前后对硝基苯酚含量的变化来检测HFM-Rha78酶的活性,结果表明:该酶的最适反应pH为6.5,温度50℃(反应5min)。浓度为1%、5%、10%的甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、DMSO、DMF、乙腈、β-巯基乙醇对酶活的影响为:除异丙醇和β-巯基乙醇外,其余有机溶剂随浓度的升高抑制力增大;异丙醇浓度为1%和5%时、β-巯基乙醇浓度为1%时对该酶活性均有促进作用。该酶热稳定性实验表明:在0-44℃放置30min,酶活均不受影响。以6mmol/L的芦丁溶液为底物,HFM-Rha78浓度分别为0.5mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL时,37℃分别酶解芦丁2、4、6、8、10、12h,利用高效液相色谱分析芦丁及其产物异槲皮素的含量,测得的结果表明,随酶浓度增加芦丁转化率增大;作用时间为10h时,芦丁转化率最大,为41.79%。

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