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《中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会论文汇编》2007年
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SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

秦莉  王西明  雷明军  潘晖榕  屈伸  吴少庭  袁仕善  黄达娜  高世同  张仁利  林绮萍  温见翔  
【摘要】:目的构建 SARS 冠状病毒棘突糖蛋白(S 蛋白)的两个片段 S1和 S2的真核表达质粒 pVAC -S1和 pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用 PCR 方法体外扩增 SARS 冠状病毒棘突糖蛋白(S 蛋白)的两个片段 S1和 S2的基因片段,定向克隆入真核表达载体 pVAC,构建 pVAC-S1和 pVAC-S2重组质粒。并把它们通过 Lipofec- tamine 2000转染到 HEK293细胞,RT-PCR 和 western-blot 鉴定重组质粒在细胞中的转录和表达。构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA 检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞仪检测小鼠脾脏 T 淋巴细胞亚群分布。结果成功构建了重组表达质粒 pVAC-S1和 pVAC-S2,并可在 HEK293细胞中表达。免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1:3200。pVAC-S1诱导了高滴度的 IgG2a,IgG2b 和 IgG1,pVAC -S2刺激产生高滴度 IgG2A,IgG2b 和较高滴度的 IgG3。脾脏 T 淋巴细胞亚群分析 CD3~+和 CD8~+T 细胞明显升高。结论构建的真核表达质粒 pVAC-S1和 pVAC-S2能达哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。

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