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《西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集》2000年
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亲和层析法纯化沙田柚花柱S-糖蛋白

杨继华  饶桂荣  薛妙男  
【摘要】:正选取经过人工自花授粉3天后的沙田柚(Citrus grandsVar·Shatiny Hort)花柱为实验材料,切取1/2部位处花柱组织,按1:5(W/V)和λO.1M Tris-Hel缓冲液(pH7.8,内含10mMNaCl,10mMEOTA-2Na,1mMCaCl_2,1MMDTT,1MMPMSF,1mMpvp),并加少许石英砂,冰浴中充分研磨成匀浆,于4℃抽提30min,冰冻离心(-4℃,12000r/m,15min),上清液按0.209g/ml室温下加入固体硫铵至35%饱和度,于4℃冰箱中静置过夜,冰冻离心,沉淀部分用缓冲浪(0.5M Tris-Hel-0.15mol/L Nacl,pH7.8)溶解,用双蒸水透析去盐,聚乙二醇浓缩,即得到35%硫酸铵盐析级分的蛋白质提取液,此液经聚丙烯酸胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白带,其中近正极端的两条带为强带.此液经ConA-Sepharose 4B亲和柱层析,收集特异峰(s#),经检测仅显示一条蛋白带,恰好是35%级分中近正极端的最优势蛋白.该蛋白为破性糖蛋白,糖含量为9.2%,SDS-PAGE分析表明它由两个亚基组
【作者单位】:广西师范大学生物系
【分类号】:S666.3

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