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拟穴青蟹SpToll基因的克隆、表达及其SNPs研究

林仲旸  章跃陵  李远友  
【摘要】:本研究采用分子生物学、免疫学的方法,对拟穴青蟹中的Toll样受体(SpToll)及其性质进行了深入的研究。结果发现,在拟穴青蟹体内存在Toll样受体同源基因SpToll,其cDNA全长3843bp,开放读码框为3018bp,编码1006个氨基酸,具有信号肽和跨膜结构域,是一种跨膜蛋白。其与日本对虾MiToll、凡纳滨对虾LvToll和果蝇DmToll等多种节肢动物Toll受体蛋白高度同源;具有典型的Toll样受体结构;在心、鳃、肝、胃、肠、肌肉、眼柄和血细胞中广泛表达,未发现明显的组织表达特异性。副溶血弧菌人工感染拟穴青蟹48h后SpToll mRNA上调极显著,约为感染前表达水平的2.5倍;在SpToll基因富亮氨酸重复序列结构域(1eucine-rich repeats,LRRs)区存在到大量的SNPs位点,多数位点突变频率约为1-4%;有意思的是c.1372AG突变率达50%以上,该突变不仅可导致其氨基酸一、二级结构的变化,尤其是可以提高其对副溶血弧菌的抗性。所获研究成果为阐明拟穴青蟹免疫防御机制及筛选拟穴青蟹优良抗逆品种等奠定了良好的基础。

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