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《渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集》2011年
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剑尾鱼CK10-like和CCL4基因mRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立及其在正常组织中的分布研究

卞荣玲  李凯彬  刘春  石存斌  吴淑勤  
【摘要】:根据剑尾鱼CK10-like和CCL4基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从剑尾鱼脾脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定,所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR GreenⅡ染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,两基因的标准品Ct值检测范围广,构建的标准曲线相关系数r2都为0.999,溶解曲线显示特异性单峰,组内和组间相关系数都小于2%,表明该检测方法特异性、重复性和稳定性良好。本实验建立了剑尾鱼CK10-like和CCL4基因实时荧光定量PCR检测方法,并检测了剑尾鱼CK10-like和CCL4 mRNA在各组织中的分布情况,发现CK10-like在肝、脾、脑、眼、肠中的表达水平较高,在后肾和鳃中也有较高的表达,在胚胎、头肾和皮肤中有少量表达,CCL4在脾、鳃、脑、眼、头肾中的表达量较高,在后肾和肝中也有较高的表达,在皮肤、肠和胚胎中有少量表达。CK10-like和CCL4基因在剑尾鱼相关免疫组中的有较高的表达量说明它们在鱼体免疫反应中起到一定作用,暗示了它们在免疫系统中的重要功能。

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