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章鱼新型过敏原-精氨酸激酶的纯化、分子克隆以及免疫原性分析

沈海旺  曹敏杰  蔡秋凤  刘光明  
【摘要】:章鱼精氨酸激酶(AK)是章鱼(Octopus fangsiao)等无脊椎动物中调节能量代谢的重要酶,但是有关章鱼AK是否过敏原研究还没有报道。本研究中,从章鱼肌肉中纯化AK,并对其理化性质、分子生物学性质以及免疫活性进行分析。结果显示:经过硫酸铵盐析和柱层析,章鱼AK被首次高度纯化,并通过蛋白免疫印迹和肽指纹图谱进行鉴定,确定为章鱼AK。章鱼AK在pH9.0、pH2.0或者42℃条件下,不稳定。对章鱼AK进行分子克隆,得到AK全长氨基酸序列,与虾蟹等甲壳类动物AK相比,同源性约为54%,但是它们的三维空间结构却十分相似。通过抑制性酶联免疫反应,发现抑制率达到50%时,章鱼AK需要量约为30ng,说明章鱼AK能与章鱼过敏患者血清中IgE有效结合,从而确定章鱼AK是章鱼一种新型过敏原,对章鱼过敏的诊断和治疗具有重要的意义。

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