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《2010年中国水产学会学术年会论文摘要集》2011年
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草鱼呼肠孤病毒NC09株的分离、鉴定及分子生物学检测方法建立

刘永奎  王庆  石存斌  曾伟伟  吴淑勤  
【摘要】:江西省是我国草鱼养殖主产区之一,每年5月份至10月份一龄及二龄草鱼种因暴发出血病而给渔民带来了巨大损失。为了最终实现对该病进行防控的目的,对病原的鉴定及检测方法的建立是最基础也是最重要的环节。本人于2009年9月下旬在江西省南昌市收集一龄、二龄具典型出血症状的草鱼种样品,取肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验。结果发现实验鱼大量死亡且出现典型出血症状,取病变组织电镜观察,在脾样品中发现病毒颗粒;CIK细胞盲传六代未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似,暂定名为NC09。将病毒提纯后获得的核酸分别经DNA酶、RNA酶和绿豆核酸酶消化,证实为双链RNA(dsRNA)病毒。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,病毒基因组由11个dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征。经大量培养的病毒株GCRV873、HZ08、NC09提取RNA,通过琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶显示,NC09株病毒是一株新的毒株。采用单引物扩增技术获得了部分序列,根据序列涉及引物,经检验引物特异性较强,从而建立该株病毒的分子学检测方法。
【作者单位】:中国水产科学研究院珠江水产研究所 上海海洋大学
【分类号】:S941

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