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凡纳滨对虾astakine全长CDNA的克隆及其在WSSV感染过程中的功能研究

梁高峰  黄倢  梁艳  
【摘要】:造血组织在甲壳类动物的免疫防御中起着非常重要的作用,而Astakine是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖的细胞因子。研究证实WSSV选择BP53(ATP合酶β亚基)作为侵染宿主的靶点,在淡水螯虾中发现BP53作为Astakine的受体参与了细胞分化。因此WSSV、BP53、Astakine之间存在着一定的联系。本实验主要针对WSSV、BP53、astakine三者之间进行研究。应用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,成功克隆了凡纳滨对虾(Litopenaeus vanname)astakine全长CDNA(GenBank登录号:HM594944),并对该基因进行了生物信息学分析。该基因全长共1846bp,含有1个372bp的开放阅读框,编码124个氨基酸,估算分子量为13.3KD,通过原核表达已获取纯化蛋白。本文使用不同的方法证实了VP37与BP53、astakine与BP53存在结合。对注射astakine蛋白(40ug/尾虾)的凡纳滨对虾进行WSSV投喂攻毒实验结果表明,注射astakine蛋白的虾对于未注射astakine蛋白的虾半数死亡天数延迟了1.23d,显示astakine蛋白对WSSV感染有一定的免疫保护作用。

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