哈维氏弧菌耐药基因SulⅡ的克隆及原核表达

【摘要】：水产养殖中细菌耐药性问题日趋严重,给水生动物疾病的预防和治疗带来很大的困难。耐药基因在决定细菌的耐药性方面发挥重要作用,为了对耐药基因作用机理有所研究,根据GenBank中注册的质粒上磺胺耐药基因SulⅡ序列设计引物,以临床分离自杂色鲍的哈维氏弧菌磺胺耐药菌为实验菌,提取质粒DNA作为模板,扩增出SulⅡ的全长基因序列。经pMD18-T载体克隆和核苷酸序列测定分析,克隆基因序列与文献报道的同源性为99%,有2个碱基差异,但编码的氨基酸没有改变,表明扩增的目的片段具有较高的可信度。进一步将SulⅡ基因按正向的开放阅读框架与表达载体pRSET连接,重组质粒经酶切鉴定正确后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,在约31000处出现一条明显的蛋白特征条带,与理论估计条带分子量相符合。本次报道为研究水产养殖细菌耐药基因及耐药基因的敲除奠定了理论基础。