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《2008年中国水产学会学术年会论文摘要集》2008年
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黑青斑河鲀干扰素γ基因的克隆、原核表达和纯化

陈洁琳  卢丹琪  贝锦新  冯丽娜  张勇  刘晓春  林浩然  
【摘要】:本研究采用生物信息学方法在模式鱼类黑青斑河鲀数据库中分析获得黑青斑河鲀IFN_γ候选基因,设计特异引物克隆得到长度为540 bp的黑青斑河鲀IFN_γ开放读码框(ORF)。黑青斑河鲀IFN_γORF编码一段长度为180个氨基酸的前体蛋白,分子量约为20.17 kD。黑青斑河鲀IFN_γ与其他鱼类及哺乳类的IFN_γ相比,尽管其基因序列变异较大,但基因结构极为保守,均由4个外显子和3个内含子组成。对已知的IFN_γ氨基酸序列进行进化树分析也表明所得到的黑青斑河鲀IFN_γ与其他鱼类IFN_γ亲缘关系较近。将IFN_γ成熟肽编码序列连接至带有组氨酸标签的表达载体pET15b,构建获得pET15b-IFN_γ原核表达质粒。将该质粒转化大肠杆菌,并通过优化IPTG浓度、温度等条件对其进行诱导表达,在37℃,0.4 mM IPTG诱导4小时得到了大量以不溶形式存在的融合蛋白,大小约为23 kD。然后对重组蛋白进行变性和透析复性,利用其所带的组氨酸标签能高度亲和镍层析柱的特性进行纯化,获得纯度较高的黑青斑河鲀IFN_γ重组蛋白,为后续蛋白功能的研究提供了基础。

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1 陈洁琳;卢丹琪;贝锦新;冯丽娜;张勇;刘晓春;林浩然;;黑青斑河鲀干扰素γ基因的克隆、原核表达和纯化[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
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