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环介导等温扩增法快速检测哈维氏弧菌的研究

操玉涛  吴灶和  简纪常  
【摘要】:环介导等温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)是一种快速灵敏的水产动物疾病诊断的新方法。利用LAMP技术,我们建立了高特异性、高灵敏度的检测哈维氏弧菌的方法。根据哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的toxR基因序列,设计了四个引物(两个外引物和两个内引物),建立Vibrio harveyi的LAMP反应检测体系。经过优化,62℃,60min完成LAMP反应,肉眼观察反应产物可见到阳性结果出现白色混浊,如添加1×SYBR Green I荧光染料,可看到阳性结果呈绿色,阴性呈橙色;将反应产物进行凝胶电泳,紫外照射下可见梯型条带。LAMP方法的最低检出限约为36 cells.mL-1,灵敏度高于PCR检测方法。

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