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《2008年中国水产学会学术年会论文摘要集》2008年
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斜带石斑鱼Ec-ILF2基因的克隆及表达特征分析

崔化春  侯志伟  闫阳  黄晓红  黄友华  许丹  秦启伟  
【摘要】:石斑鱼是一种重要的海水经济鱼类,多种病原体包括细菌或病毒对石斑鱼养殖业造成了巨大的经济损失。因此对于对石斑鱼免疫系统及免疫调节因子的研究,显得尤为重要。白介素增强子结合因子(ILF2)是NF-AT家族中的重要一员,其主要和细胞特异性表达白细胞介素2(IL2)有关。哺乳动物中,ILF2被证实不仅可以调节IL2基因的表达,而且可以特异结合部分病毒RNA,从而调控病毒基因组的复制及基因表达。本研究通过设计简并引物,RACE扩增得到石斑鱼ILF2基因Ec-ILF2的全长cDNA序列。计算机辅助分析结果表明,Ec-ILF2具有两个天冬酰胺N末端糖基化位点和五个蛋白激酶C磷酸化位点,另外还包含一个保守的RNA结合结构域。对Ec-ILF2进行了原核表达,并制备小鼠多克隆抗体。构建重组质粒pEGFP-EcILF2并转染鱼类细胞,结果显示Ec-ILF2主要表达于细胞核;与免疫荧光显微镜观察结果一致。利用Realtime RT-PCR分析Ec-ILF2的组织分布,表明Ec-ILF2在各主要组织中均有表达,但在肝脏组织中的表达量最高,在肠,肌肉,心脏中表达较低。此外,我们分析了外界因素包括新加坡石斑鱼虹彩病毒SGIV,创伤弧菌,副溶血弧菌,金黄色葡萄球菌,LPS等刺激石斑鱼后Ec-ILF2的表达变化,结果揭示Ec-ILF2的表达在刺激之后均受到一定程度的抑制。以上结果提示Ec-ILF2可能在石斑鱼的免疫应答过程中,发挥着重要的作用。进一步对Ec-ILF2在免疫应答过程中作用机理的研究,将为石斑鱼的病害防治提供一定的帮助。

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