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《中国水产学会第五届青年学术年会摘要集》2004年
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方正银鲫微卫星序列的筛选及PCR扩增产物的初步检测

贾智英  孙效文  梁利群  
【摘要】:本文采用经典的分子生物学方法构建方正银鲫(CARASSIUS AURATES GIBELIO(BLOCK))的部分基因组文库,并用非影印的方法将转化子转移到硝酸纤维素滤膜上。然后用人工合成、并经放射性同位素[Γ-~(32)P]ATP标记的(CA)_(15)探针对构建的方正银鲫基因组文库进行筛选,获得137个阳性克隆,经测序得到微卫星序列130个,其中完美型、非完美型、混合型分别占64.3%、16.9%、18.8%。应用在线软件PRIMER3和软件PRIMER5对微卫星侧翼序列进行引物设计,共得到引物103对。合成其中30对,然后用这些引物PCR扩增,扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳EB染色和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染后进行检测。电泳结果为:琼脂糖凝胶电泳只能观察到一条比较清晰的带;而用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳能检测出多条清晰的带,而且还有多态性片段存在,同时发现每个基因座的等位基因数比理论上的多的多,而且个体之间等位基因的数目差异也很大,这是预期所没有推测到的结果,同时也是其它分子标记所检测不到的现象,它从基因组水平反映了方正银鲫DNA序列特征,因而本实验所获得的徽卫星分子标记将是进一步研究方正银鲫特殊遗传机制的一个很好的手段。
【作者单位】:上海水产大学 黑龙江水产研究所生物技术研究室
【分类号】:S917.4

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