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《第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集》2011年
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两种穿孔液在人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流记录中的应用

王华  李涛  丁银元  李妙龄  杨艳  曾晓荣  
【摘要】:目的探讨两种穿孔液在穿孔膜片钳(PPR)技术记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道(smallconductance Ca~(2+)-activated K~+ channels,SK_2)电流中各自的特性及可能的用途。方法急性酶分离体外循环术中取得的右心耳,以获得的单个人心房肌细胞为研究对象,采用二性霉素B(amphotericin B)或混合β-escin与二性霉素B作为穿孔液,进行穿孔膜片钳实验,形成全细胞后记录人心房肌细胞SK_2电流。结果 200μg·mL~1二性霉素B穿孔膜片钳记录SK_2电流时,10min左右可形成稳定全细胞记录模式,通常认为其形成孔道的有效半径为0.4~0.8nm,对细胞损伤小,细胞内环境稳定,通道电流的衰减现象缓慢,Na~+、K~+、Li~+、Cs~+、Cl等一价离子可以有效通过。适用于记录细胞动作电位的研究,但其缺点是二价阳离子不能通过细胞膜,因此在进行SK2电流Ca~(2+)调控研究中,此方法有缺陷。实验证实单独使用6.25μmol·L~1β-escin或150μg·mL~1二性霉素B时均不能形成穿孔膜片钳模式,但按此比例混合两种穿孔液进行穿孔膜片钳实验时,穿孔液可与脂质双分子层中的胆固醇产生有效的相互作用形成孔道,且不影响封接、电流run-down现象减慢,Ca~(2+)可以通过其形成的孔道,SK_2通道可随电极液至细胞内的游离钙离子的浓度增加而激活。结论将二性霉素B与β-escin混合使用进行穿孔膜片钳技术是一种稳定的形成全细胞膜片的技术,可以用于胞内游离钙离子对SK_2电流调控的研究。

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