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《第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集》2011年
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miR-1/miR-206通过调控Hsp 60表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡

单志新  林秋雄  邓春玉  朱杰宁  麦丽萍  符永恒  谭虹虹  林曙光  余细勇  
【摘要】:目的 miRNA是一种长度约为18~25 nt的非编码小RNA,存在于多种生物体中,每个miRNA都可能靶向单个或多个mRNA。miRNA可以与mRNA的3'非翻译区(UTR)结合并引发相应靶mRNA的降解或抑制靶蛋白的翻译。miRNA有着复杂的生物学功能,参与多种生命活动和疾病的发生过程,比如细胞增殖、分化、凋亡,肿瘤发生和多种心血管疾病。Hsp 60在糖尿病性心肌损伤中发挥保护作用,但在糖尿病性心肌中表达下调,具体机制不清楚。本文将研究高糖条件下,miR-1/miR-206对心肌中miR-16表达的调控作用,及对心肌细胞凋亡的作用。方法分别建立小剂量STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型和25 mM D-glucose处理的大鼠心肌细胞模型。分别检测糖尿病性心肌组织和高糖处理的大鼠心肌细胞中miR-1/miR-206和Hsp60水平。用双荧光报告基因系统、定量PCR和Western-blot检测证实miR-1/miR-206对Hsp60表达的调控作用。通过TUNEL、Caspase9活性和死亡细胞DNA检测证实miR-1/miR-206促心肌细胞凋亡作用。利用双荧光报告基因系统、RNAi技术和特异的信号通路抑制剂研究介导高糖处理的心肌细胞中miR-1/miR-206表达的转录因子和信号通路。结果 miR-1/miR-206在糖尿病性心肌组织和高糖处理的大鼠心肌细胞中表达显著升高,而Hsp60只在蛋白水平显著下调(P0.05)。Hsp60基因的3'UTR存在miR-1/miR-206的结合序列,miR-1/miR-206可以在转录后水平调控Hsp60的表达。增加miR-1、miR-206表达的心肌细胞和转染了Hsp60siRNA的心肌细胞,高糖诱导后的凋亡水平显著升高,miR-1和miR-206调控心肌细胞凋亡没有叠加作用。miR-1和miR-206编码DNA的5'调控区存在转录因子SRF的识别序列,SRF参与了高糖诱导的心肌细胞中miR-1/miR-206的表达。高糖诱导的心肌细胞中p-ERK水平升高,MEK1/2抑制剂PD98059能抑制高糖诱导的心肌细胞中miR-1/miR-206的表达。IGF-1能抑制高糖诱导的心肌细胞中miR-1/miR-206的表达。结论 MEK1/2通路和SRF参与了高糖诱导的心肌细胞中miR-1/miR-206的表达,Hsp60介导了miR-1/miR-206对心肌细胞凋亡的促进作用。

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