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《中国奶牛协会2007年会论文集(上册)》2007年
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蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达

周兴  张居农  
【摘要】:构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA 的重组逆转录病毒栽体 pLN-BCP-LK~R,以200μg、500μg、1000μg、 2000μg 的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg 为最佳表达剂量。利用脂质体转染 PA317包装细胞,通过 G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后收集病毒上清感染 NIH_3T_3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×10~4CFU/mL。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经 FAPA 法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。

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